Determinación De Fosfatasa Alcalina

Objetivo general

Determinaremos los valores de fosfatasa alcalina en el suero de un compañero, además de comprender la función e importancia de esta hidrolasa en el organismo.

Objetivos específicos

Interpretaremos los resultados obtenidos de la determinación de la actividad de la fosfatasa alcalina en suero.

Conoceremos por qué y para qué es importante la fosfatasa alcalina en el diagnóstico clínico.

Introducción

Es una enzima hidrolasa responsable de eliminar grupos fosfatos de varios tipos de moléculas como nucleótidos, proteínas y alcaloides. Está presente en casi todos los tejidos del cuerpo, es especialmente alta en el epitelio intestinal, los túbulos renales, huesos, hígado y placenta.

La fosfatasa alcalina cataliza la hidrólisis del p-nitrofenilfosfato a pH 10,4 liberando p-nitrofenol y fosfato. La fosfatasa alcalina en suero cataliza la hidrólisis de timolftaleína, monofosfato a iones de timolftaleína y fosfatos. Al agregar álcali, simultáneamente se para la reacción enzimática y convierte la timolftaleína liberada de incolora en color azul.

La reacción es específica para la actividad de la fosfatasa alcalina en suero. Los valores pueden ser falsamente elevados, con el suero hemolizado o por dejar el suero a temperatura ambiente por un largo período de tiempo. La reacción enzimática puede bajar por EDTA, oxalato o fluoruro. La prueba no se afecta por niveles normales de bilirrubina, aminoácidos, vitaminas, colesterol, creatinina, urea, ácido úrico, fósforo o electrólitos.

La fracción hepática de la fosfatasa es termoestable, la que viene del hueso, sistema reticulo endotelial y vesicular es termolábil. Estas isoenzimas se diferencian por su estructura molecular, propiedades fisicoquímicas, antígenas y catalíticas. Se puede presentar también en formas atípicas, formas de origen neoplásico y formas de migración lenta.

La actividad sérica de fosfatasa alcalina ósea en condiciones normales alcanza su mayor actividad en los niños en edad de crecimiento, debido a que esta isoenzima se localiza en los osteoblastos. También durante el primer trimestre de embarazo se presenta un aumento de esta isoenzima placentaria.

La fosfatasa alcalina tiene dos aplicaciones clínicas muy útiles: en enfermedad hepática y en enfermedad metabólica ósea.

Resultados

Muestra: Adriana Reyes

Inicial Minuto 1 Minuto 2 Minuto 3

Absorbancia 1.312 1.332 1.355 1.377

Muestra: Luis Antonio Espínola Barbosa

Inicial Minuto 1 Minuto 2 Minuto 3

Absorbancia 1.305 1.327 1.357 1.383

Incremento de absorbancia por minuto

Muestra: Adriana Reyes

Promedio de incremento de absorción U/L de FAL

Minuto 1 0.020 66.0

Minuto 2 0.023 75.9

Minuto 3 0.022 72.6

Muestra: Luis Antonio Espínola Barbosa

Promedio de incremento de absorción U/L de FAL

Minuto 1 0.022 72.60

Minuto 2 0.030 99.00

Minuto 3 0.026 85.80

Discusión

El primer paso para llevar a cabo esta práctica fue obtener una muestra de sangre de los compañeros Luis Antonio Espínola Barbosa y Adriana Reyes.

1. Se ajusta la longitud de onda del espectrofotómetro a una longitud de onda de 405 nm.

2. Se ajustó el espectrofotómetro a cero frente a aire.

3. Por muestra se realizó lo siguiente:

4. En una cubeta se pipeteó lo siguiente:

RT (mL) 1,2

Muestra (μL) 20

5. Se incubó la solución por un minuto.

6. Se leyó la absorbancia inicial de la muestra, y se midió la absorbancia de la muestra cada minuto durante 3 minutos.

Al obtener la absorbancia de cada muestra durante 3 minutos, se promedio el incremento de absorbancia por minuto y se calculó la concentración de fosfatasa alcalina en unidades por litro (U/L), en donde obtuvimos valores de FAL dentro de los valores de referencia a 25° C (60 – 170 U/L) con los cuales podemos observar que nuestras muestras se encuentran en un rango normal.

Conclusiones

Respecto a la práctica pudimos observar que de acuerdo a los resultados obtenidos se podría decir que la práctica fue realizada con éxito, ya que se mostraron valores de FAL dentro del rango de 25° C (60 – 170 U/L) y no valores exagerados como en algunas otras prácticas, en donde obteníamos valores muy altos o muy bajos con respecto a los valores de referencia. Por lo tanto podemos deducir que no tuvimos ningún error al realizar este procedimiento.

Cuestionario

1. ¿Qué actividad enzimática cataliza la fosfatasa alcalina?

La fosfatasa alcalina cataliza la hidrólisis del p-nitrofenilfosfato a pH 10,4 liberando p-nitrofenol y fosfato. La fosfatasa alcalina en suero cataliza la hidrólisis de timolftaleína, monofosfato a iones de timolftaleína y fosfatos.

2. Clasificación de la fosfatasa alcalina

1. ISOENZIMA HEPATICA AP-1 α

2. ISOENZIMA OSEA AP-2 β

3. ISOENZIMA INTESTINAL AP-3 β

4. ISOENZIMA PLACENTARIA AP-2-4

La actividad sérica de la fosfatasa alcalina hepática está inducida por una síntesis “de novo” en el hepatocito, vinculada al proceso hepatobiliar y su separación de la membrana celular del hepatocito por medio de una fosfolipasa D, produce el aumento en circulación. En los ductos biliares esta liberación es llevada a cabo por complejos macromoleculares (lipoproteína X), que se detectan

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