Actividad Ureasica en muestras de origen biológico
Enviado por kaas • 24 de Septiembre de 2013 • Práctica o problema • 5.165 Palabras (21 Páginas) • 548 Visitas
- Actividad Ureasica en muestras de origen biológico.
Materiales:
- Gradilla
- Tubos de ensayos
- Beaker de 100 y 400 ml
- Erlen meyer de 125 ml
- Pipetas de 5 y 10 ml
- Matraz aforado de 100ml
- Probeta de 100ml
- Bureta de 125ml
- Soporte universal
- Papel filtro
- Espátula
- Agitador
- Baño de maría
- Centrifugadora
- Balanza
- Gotero
- Mortero
- Vidrio reloj
Muestras:
- Harina de cereal
- Forraje
- Suelo
Reactivos
- Urea al 0,1% en Buffer fosfato de ph=7
- Urea 0,25m
- HgCl2 al 1%
- HCL 0,1N
- Indicador Tashiro
Preparación de 100ml de urea 0,25m
- Peso molecular urea = 60,06g
#moles Sto
M =
Lt Sln
# moles Sto = M x Lt Sln
# moles Sto = 0,25 mol x 0,1 Lt
Lt Sln
# moles Sto = 0,025 Urea
g Urea = 0,25 # mol urea x 60,06g Urea
1 mol
g Urea = 0,501g
Preparaciòn de 200 ml de HCl 0,1N
- Peso molecular del HCl = 36,45g
- -Densidad del HCl = 1,19g/ml
# eqgsto
N =
Lt Sln
# eqgsto = N x Lt Sln
# eqgsto = 0,1eqg/Lt x 0,2 Lt
# eqgsto = 0,02HCl
1eqgHCl 36,45g HCl
0,02eqgHCl x
0,02eqgHCl x 36,45gHcl
X=
1eqgHCl
X= 0,729g HCl
36,45g HCL 100g
0,729gHCl x
0,729gHCl x 100g
X=
36,45gHCl
X= 2,0gHCl
m m 2,0g HCl
D= V= = = 1,68ml HCl
V V 1,19g/ml HCl
Preparaciòn de Ureasa al 0,1%
V analito
% v/v = x 100
V muestra
V muestra x v/v
V analito =
100%
100ml x 0,1%
V analito =
100%
V analito = 0,1ml
Preparación de Sln de NaCl
g analito
% P/V= x 100
V muestra
V muestra x P/V
g analito =
100
100 ml x 1g/ml
g analito =
100
g analito = 1g
Procedimiento de practica .
En tres (3) tubos de ensayos, colocar a cada uno de ellos un gramo de harina, un gramo de forraje y un gramo de suelo.
Posteriormente adicionar a cada tubo 10 ml de NaCl al 1%, agitar y centrifugar a 3.500 RPM durante 10 minutos
Luego sacar los tubos de la centrifugadora y medir el sobrenadante de cada tubo.
EHAU 5,1 ml de sobrenadante
EFAU 6,0 ml de sobrenadante
ESAU 8,3 ml de sobrenadante
Ml reactivos x tubos B St 1 2 3 4
Urea 0,25 m 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml
Bufferfosfato Ph=7 5ml 4,5ml 4,5ml 4,5ml 4,5ml 4ml
HgCl2 4gotas
B St 1 2 3 4
Ureasa 0,5 % _ 0,5ml - - - -
EHAU - - 0,5ml - - -
ESAU - - - 0,5ml - 1ml
EFAU - - - - 0,5ml -
Colocar los tubos en el baño de maría a 37o durante 20 minutos.
Cumplido este tiempo (20 minutos) se sacan los tubos del baño de maría y se le adicionan 4 gotas HgCl2 a cada tubo.
B St 1 2 3 4
HCl 2 - 4 gotas 4 gotas 4 gotas 4 gotas 4 gotas
Luego adicionamos 2 gotas del indicador Tashiro a cada tubo y agitamos durante 15 segundos.
B St 1 2 3 4
Indicador - 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas
Tashiro
El color verdoso indicara que la prueba es positiva para actividad ureasica en las muestras de cada tubo.
Posteriormente se sacan las muestras de los tubos y se colocan en un Erlen Meyer para ser titulados con HCl 0,1N
Tubos
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