Evolución De La Respuesta Humoral Contra Antígenos De Membrana De Merozoito De Babesia Bovis A Lo Largo Del Tiempo En Bovinos Infectados Experimentalmente

“Evolución de la respuesta humoral contra antígenos de membrana de merozoito de Babesia bovis a lo largo del tiempo en bovinos infectados experimentalmente”

Gustavo Daniel Asenzo

Tesis de Licenciatura en Biotecnología

Escuela de Ciencia y Tecnología

Universidad Nacional de Gral. San Martín

Marzo de 2004

Tema: “Evolución de la respuesta humoral contra antígenos de membrana de merozoito de Babesia bovis a lo largo del tiempo en bovinos infectados experimentalmente”

Alumno: Gustavo Daniel Asenzo L.U. N°: 779/97

Palabras claves: Babesia bovis, babesiosis bovina, VMSA, antígenos de la superficie del merozoito, respuesta humoral

Directora de Trabajo: Dra. Mónica Ofelia Jacobsen de Florin-Christensen

Lugar de Trabajo: Instituto de Virología perteneciente al Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas (CICVyA)

Fecha de iniciación: 12 de Abril de 2002

Fecha de finalización: 5 de marzo de 2004

Fecha de entrega: 22 de marzo de 2004

Fecha de examen: 26 de marzo de 2004

Agradecimientos

Mónica

Mariana

Rosalía

Silvina

Anabel

Susana

Ignacio

Patricia

Diego

Marisa

Instituto de Virología

Grupo de Tuberculosis

Rodolfo y Marta

Eugenia

Gabriela

Pablo

Andrés

Fernando

Hernán

Damián

Chino

Pablo

Indice

1. Resumen................................................................................................

2. Introducción...........................................................................................

2.1. Generalidades..................................................................................

2.2. Clasificación filogenética................................................................

2.3. Ciclo de vida....................................................................................

2.4. Respuesta inmune............................................................................

2.5. Signos clínicos.................................................................................

2.6. Diagnóstico......................................................................................

2.7. Tratamiento......................................................................................

2.8. Prevención.......................................................................................

2.9. Objetivo del trabajo.........................................................................

3.Materiales y métodos..............................................................................

3.1. Extracción de DNA de la cepa R1A de Babesia bovis....................

3.2. Amplificación de los genes de interés por PCR..............................

3.3. Clonado en vector de expresión y transformación de células competentes......................................................................................

3.4. Preparación de células competentes................................................

3.5. Selección de clones positivos..........................................................

3.6. Inducción de la expresión en los clones seleccionados......................

3.7. Purificación de plásmidos................................................................

3.8. Purificación de proteínas recombinantes............................................

3.9. Muestras de sueros. ........................................................................

3.10. Medición de títulos de anticuerpos por ELISA. ...........................

4. Resultados..............................................................................................

4.1. Desarrollo de test de ELISA para la determinación de títulos de anticuerpos contra distintos antígenos de B. bovis...........................

4.1.1. Preadsorción de los sueros .....................................................

4.1.2. Tiempo y temperatura de sensibilización...............................

4.1.3. Tipos de bloqueantes y tiempos de bloqueo...........................

4.1.4. Titulación de antígenos...........................................................

4.1.5. Protocolo final de ELISA.......................................................

4.2. Evolución en el tiempo de los títulos de anticuerpos contra diversos antígenos de B. bovis en infecciones experimentales.........

4.2.1. MSA-2c..................................................................................

4.2.2. RAP-1.....................................................................................

4.2.3. MSA-1....................................................................................

4.2.4. MSA-2b..................................................................................

5. Discusión......................................................................................

6. Bibliografía...................................................................................

Lista de abreviaturas..................................................................................

Pág. 5

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Pág. 8

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Pág. 10

Pág. 11

Pág. 12

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Pág. 18

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Pág. 23

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1. Resumen

Babesia bovis es un protozoo parásito intraeritrocítico, que se transmite a los bovinos por picaduras de garrapatas. Las infecciones por este parásito son endémicas en vastas áreas tropicales y subtropicales del mundo y causan importantes daños económicos. La vacunación con merozoitos de B. bovis atenuados en su patogenicidad es una de

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