Análisis de resultados: Determinación colorimetrica de los acidos nucleicos

Análisis de resultados:

DETERMINACIÓN COLORIMETRICA DE LOS ACIDOS NUCLEICOS.

a) Reacción colorimétrica con reactivo de Bial: Esta prueba se fundamenta en una reacción que permite reconocer solo pentosas y sustancias que la contengan en este caso se reconoce la pentosa del DNA Y RNA .En la reacción el ácido clorhídrico hidroliza las uniones fosfodiéster y N-Glicosídicas liberando la pentosa (Ribosa o desoxirribosa), bases púricas y pirimídicas y ácido fosfórico. La pentosa en medio ácido se deshidrata originando el furfural que reacciona con el orcinol dando un producto verde-azulado que demuestra la presencia de ADN Y RNA.

• La prueba con el reactivo de Bial dio un color amarillo tenue y esto pudo deberse a que la reacción de la pentosa con el furfural no fuese completa debido a la poca cantidad de DNA obtenido o a la presencia de impurezas en la muestra de DNA como residuos de papaya o del ambiente mismo.

b) Reacción colorimétrica con la difenilamina: La desoxirribosa del DNA reacciona con la difenilamina en medio ácido para dar un compuesto azul. En la reacción las desoxipentosas sufren deshidratación debido a una hidrólisis ácida dando aldehídos d-hidroxilevunílicos, estos reaccionan con la difenilamina dando un compuesto con coloración azul determinable a 595 nm. En el DNA sólo dan la reacción positiva la desoxirribosas unidas a bases púricas debido a que estas se liberan y la desoxirribosa adopta configuración abierta dentro de la cadena del DNA.

• La prueba con la difenilamina no dio una coloración debido a que esta prueba se realiza con un medio ácido y nosotros en el laboratorio no colocamos la muestra en un medio ácido antes de agregar la difenilamina o pudo deberse como en la prueba de Bial a la poca cantidad de DNA obtenido o a la presencia de impurezas.

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