Bioquikca

DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS POR EL MÉTODO DE BRADFORD

(no sacar esta hoja)

Blanco: Este tubo no contiene proteína, se reemplaza la muestra por agua y se le agrega el correspondiente volumen de reactivo. Se realiza para determinar la absorbancia del reactivo, este valor se descuenta de la absorbancia del resto de los tubos.

Curva de calibración: Para su realización se utilizará la solución testigo de concentración conocida. Con la medida de absorbancia de cada tubo y conociendo la cantidad de proteínas que contiene cada uno de los tubos, es posible realizar una curva de calibración (gráfico A595 vs g de proteína). Es necesario realizarla cada vez que se procesen las muestras. La concentración del TESTIGO es 100 g/ml.

Muestra incógnita: se procesa en simultáneo y en las mismas condiciones que la curva de calibración. El tubo contiene la muestra y la misma cantidad de reactivos que los anteriores. Para conocer la cantidad de proteínas de la muestra (g), se determina la absorbancia de la misma y se interpola en la curva de calibración. Cada grupo procesa una sola Muestra incógnita (A o B).

Protocolo:

Tubo

H2O

(l)

Testigo

(l)

Muestra

A o B

(l)

Reactivo de

Bradford

(ml)

Proteína

(g)

Absorbancia

a 595 nm

Blanco 600 -------- ---------- 2

1 450 150 ---------- 2

2 300 300 ---------- 2

3 -------- 600 ---------- 2

Muestra

A o B -------- ------- 600 2

Procedimiento:

Pipetear en el orden de la tabla:

- Primero el AGUA con la pipeta de 1 ml (rotulada H2O).

- El TESTIGO con otra pipeta de 1 ml (rotulada T) respetando el orden de los tubos: 1,2 y 3.

- Luego con otra pipeta de 1 ml (rotulada A o B según corresponda) la MUESTRA INCÓGNITA en su tubo correspondiente.

-Por último, el reactivo de Bradford con la pipeta de 5 ml (rotulada

...