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Enviado por espa131415 • 30 de Octubre de 2013 • 431 Palabras (2 Páginas) • 222 Visitas
DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS POR EL MÉTODO DE BRADFORD
(no sacar esta hoja)
Blanco: Este tubo no contiene proteína, se reemplaza la muestra por agua y se le agrega el correspondiente volumen de reactivo. Se realiza para determinar la absorbancia del reactivo, este valor se descuenta de la absorbancia del resto de los tubos.
Curva de calibración: Para su realización se utilizará la solución testigo de concentración conocida. Con la medida de absorbancia de cada tubo y conociendo la cantidad de proteínas que contiene cada uno de los tubos, es posible realizar una curva de calibración (gráfico A595 vs g de proteína). Es necesario realizarla cada vez que se procesen las muestras. La concentración del TESTIGO es 100 g/ml.
Muestra incógnita: se procesa en simultáneo y en las mismas condiciones que la curva de calibración. El tubo contiene la muestra y la misma cantidad de reactivos que los anteriores. Para conocer la cantidad de proteínas de la muestra (g), se determina la absorbancia de la misma y se interpola en la curva de calibración. Cada grupo procesa una sola Muestra incógnita (A o B).
Protocolo:
Tubo
H2O
(l)
Testigo
(l)
Muestra
A o B
(l)
Reactivo de
Bradford
(ml)
Proteína
(g)
Absorbancia
a 595 nm
Blanco 600 -------- ---------- 2
1 450 150 ---------- 2
2 300 300 ---------- 2
3 -------- 600 ---------- 2
Muestra
A o B -------- ------- 600 2
Procedimiento:
Pipetear en el orden de la tabla:
- Primero el AGUA con la pipeta de 1 ml (rotulada H2O).
- El TESTIGO con otra pipeta de 1 ml (rotulada T) respetando el orden de los tubos: 1,2 y 3.
- Luego con otra pipeta de 1 ml (rotulada A o B según corresponda) la MUESTRA INCÓGNITA en su tubo correspondiente.
-Por último, el reactivo de Bradford con la pipeta de 5 ml (rotulada
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