Cistologia

CITOLOGIA

Autor:

CESOLARI, José Alberto Miguel

Material Extraído, Corregido y Aumentado de “HISTOKIT”. Autores: D’Ottavio, A.E; Bassan, N.D.; Cesolari, J.A.M.; Tellez, T.E.; 1994.

MEDIOS DE EXAMEN BIOLÓGICOS– MÉDICOS

Microscopios

Consideraciones Previas

La visión es uno de los sentidos capitales de los seres vivientes. A su través, estos se adaptan al medio, relacionándose y defendiéndose. En una etapa posterior, interpretan su entorno y algunos, aun, lo modifican.

En personas visualmente normales, el ojo tiene un límite en su capacidad de discriminación o separación de imágenes. Así, a una distancia de 2 metros podrá distinguir dos puntos separados, como mínimo, por 1.000.000 de Ángstrom (Aº) (ver dimensiones en el anexo). Esto constituye el límite de resolución (separación) del ojo humano. Por el contrario, una persona con incapacidad visual, no distingue, en las mismas circunstancias, ambos puntos como diferentes sino que los ve como un punto único indiscriminado

El tallado de vidrios posibilitó tanto la corrección de defectos visuales (anteojos) como el acceso a una observación más detallada de varios objetos (lupas). Mas aun, el empleo de estos vidrios tallados (lentes) colocados superpuestos a lo largo de un soporte apropiado, posibilitó una nueva capacidad de visión lejana hasta el momento inaccesible. Así, el catalejo cambió las concepciones de la guerra cuando los desplazamientos de los vehículos de combate eran lentos y el telescopio aportó conceptos científicos que conmovieron profundamente las ideas de este tiempo.

En suma, esta disposición de lentes superpuestas y enhebradas sobre el mismo eje óptico, a lo largo de un soporte o montura (sistema óptico centrado), permitió corregir, mejorar y aumentar la percepción del mundo visible. Otro sistema óptico centrado, dio acceso al mundo de las bacterias, las células, etc. Esto es, abrió al ojo las puertas de un mundo, hasta entonces invisible. Inicialmente rudimentario, el microscopio fue adquiriendo, a través del tiempo, perfeccionamientos sucesivos hasta llegar a la gama actual de las posibilidades que brinda cada tipo según las necesidades.

MICROSCOPIO ÓPTICO (MO), de Luz, Fotónico o de Campo Claro

En esencia, el microscopio es un sistema óptico centrado, porque representa una sucesión de lentes convergentes hilvanados sobre el mismo eje óptico a lo largo de un soporte o montura.

Cada lente recoge y aumenta la imagen dada por la inmediata anterior; el conjunto permite la visualización aumentada y en detalle del objeto en estudio.

La preparación con el objeto a estudiar se ubica sobre un soporte aplanado (platina) y debe ser iluminada convenientemente a partir de una fuente luz directa. Para eso, se interpone entre ésta y el objeto, un sistema de lentes en la subplatina (el condensador) que recoge los haces de luz de la fuente y los concentra sobre el objeto. A esta acción de reunir, de condensar la mayor cantidad de rayos sobre lo visualizado, debe su nombre. Los haces que han atravesado el objeto ingresan, luego, al sistema de lentes próximo al mismo (objetivo). Cuanto mayor sea el número de ellos que penetran al objetivo (apertura numérica), mayor será la capacidad de éste, en particular, y del microscopio en general para ver como distintos dos puntos muy próximos entre sí. Esta capacidad o potencialidad del objetivo y del microscopio se designa poder de resolución del microscopio óptico.

Pero en la determinación de este poder, no sólo juega la cantidad de rayos luminosos que ingresan al objetiva (vale decir, la apertura numérica) sino la calidad de los mismos (esto es, la longitud de onda). Así, el poder resolutivo (PR) del MO es directamente proporcional a la apertura numérica (AN) (a más rayos, mejor discriminación particular del objeto) e inversamente proporcional a la longitud de onda (LO) (a menor longitud de onda -color violeta- mejor PR y a mayor longitud de onda –color rojo- peor PR). En suma: PR =AN/LO (generalmente se toma la LO de la banda del verde amarilllo, 0,55 µm (micrómetros), por ser el ojo humano más sensible a los colores). Sin embargo, el poder de resolución es una capacidad o potencialidad. Se lo puede expresar como medida a través de su inversa: el límite de resolución, la mínima distancia a la que el MO distingue dos puntos próximos como distintos. Esa distancia es de 0,2 µm (2000 Aº). (200 nm).

Se pueden rever estos conceptos diciendo que, a mayor poder resolutivo, menor tendrá que ser la distancia de separación de objetos próximos para percibirlos como distintos; o sea, menor tendrá que ser el límite de resolución.

1 Longitud de onda

LR = -------- x K = ----------------------------- x K

PR Apertura numérica

K = Constante estima en 0.61

Nótese que en la montura metálica del objetivo se hallan grabados dos números de tamaño relativamente considerable, separados por una barra. El primero de ellos (por ej. 10x – 40x) señala el aumento propio del objetivo, indicando las veces que aumenta lo que se observa (diez y cuarenta veces, respectivamente).

Por su parte, el segundo número (por ej. 0,25 ó 1,10) señala su apertura numérica. Si el número es menor a 1 (0,25) ingresan menos de 100 rayos cada 100 que han atravesado el objeto y el objetivo trabaja al aire (objeto seco). Si el número es igual o ligeramente superior a 1 significa que penetra la totalidad de rayos emitidos del objeto y se trata de un objetivo que debe operar con un líquido (objetivo húmedo o de inmersión). El líquido que se utiliza es el aceite de cedro.

Hay que recalcar que aumento propio y apertura numérica, si bien son parte importante de una óptima visión microscópica, son distintos en sus resultados. El aumento está vinculado con el tamaño de la imagen final. La apertura numérica está relacionada con el poder y el límite de resolución e influye sobre la nitidez de discriminación.

Superado el objetivo, los rayos lumínicos atraviesan otro sistema de lentes próximo al ojo (ocular) que aumenta, a manera de lupa, la imagen dada por el objetivo. El ocular esta compuesto por dos lentes: la inferior, de campo o colectora y la superior o frontal.

El aumento final

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