“DETERMINACIÓN DEL PESO MOLECULAR DE UNA PROTEÍNA USANDO CROMATOGRAFÍA POR EXCLUSIÓN MOLECULAR”.

jaintoralEnsayo25 de Febrero de 2016

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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL[pic 1][pic 2]

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Laboratorio de Métodos de Análisis

“DETERMINACIÓN DEL PESO MOLECULAR DE UNA PROTEÍNA USANDO CROMATOGRAFÍA POR EXCLUSIÓN MOLECULAR”.

Alumno: Hernández Toral Leonardo Jain

Grupo: 4IM1

Sección 2

Profesor:

Luis Francisco Vázquez Flores

10 de diciembre del 2015

Según la definición dada por Keulemans la cromatografía es un método de separación en el que los componentes a desglosar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales constituye un lecho estacionario de amplio desarrollo superficial y la otra es un fluido que pasa a través o a lo largo del lecho estacionario.1

La cromatografía de exclusión es un tipo de cromatografía líquida en la cual la fase estacionaria es sólida y la fase móvil es líquida. Se utiliza el término de “Cromatografía de exclusión por tamaño”. También se denomina “cromatografía de permeabilidad sobre gel” (GPC) o de permeación en gel. Su principal aplicación es la separación de las moléculas en función de su tamaño con la finalidad de estudiar el peso molecular y distribución de los polímeros).2

Objetivos

Conocer el fundamento de la cromatografía por exclusión molecular.
Encontrar el peso molecular de una proteína gracias a la cromatografía por exclusión molecular
Mencionar los factores críticos que influyen en la separación por cromatografía por exclusión molecular.

Resultados

Tabla 1. Determinación de volumen vacío (V0).

Volumen de elución (mL)	A615
3	0
6	0
9	0
12	0
15	0,592
18	0,661
21	0,132
24	0,050
27	0,027
30	0,014
33	0,009
36	0,015
39	0

[pic 3]

El volumen en el cual se presenta la mayor absorbancia es nuestro volumen de vacío, el cual fue de 18 ml.

Tabla 2. Determinación del volumen de elución de las proteínas.

Volumen de elución	Absorbancia
Hemoglobina A405	Peróxidasa A405	Tripsina A280	Lisozima A280	Proteína problema A280
3	0,041	0,002	0	0,302	0
6	0,033	0,009	0	0,221	0,023
9	0,029	0,007	0	0,266	0,040
12	0,023	0,002	0	0,141	0
15	0,451	0,001	0	0,113	0
18	1,513	0,011	0,002	0,224	0,383
21	1,455	0,570	0,075	0,505	0,596
24	1,157	0,979	0,156	0,875	0,802
27	0,771	0,501	0,174	0,832	0,795
30	0,424	0,157	0,142	0,687	0,635
33	0,222	0,157	0,104	0,423	0,610
36	0,100	0,046	0,105	0,256	0,574
39	0,084	0,020	0,099	0,153	0,490
42	0,065	0,009	0,083	0,142	0,500
45	0,063	0,015	0,039	0,062	0,439
48	0,061	0,008	0,013	0,096	0,221
51	0	0,005	0,002	0,048	0,058
54	0	0,014	0,006	0,082	0
57	0	0	0	0,061	0
60	0	0	0	0,078	0
63	0	0	0	0,096	0
66	0	0	0	0,044	0
69	0	0	0	0,080	0
72	0	0	0	0,064	0
75	0	0	0	0.043	0
78	0	0	0	0.091	0

[pic 4]

Tabla 3. Relación de Ve/Vo y el logaritmo del peso molecular de las proteínas patrón y problema.

Proteínas	Vo (mL)	Ve (mL)	Ve/Vo	PM (g/mol)	Log PM
Hemoglobina	18	18	1.0	64500	4.809
Peroxidasa	18	24	1.33	44050	4.643
Tripsina	18	27	1.5	24000	4.380
Lisozima	18	27	1.5	14400	4.158
Problema	18	24	1.33	¿?	-

[pic 5]

De acuerdo a la ecuación de la recta establecida en la figura anterior se interpola el valor para la proteína problema.

De la ecuación de la recta y= mx + b

Se tiene que: y= Ve/Vo x= log PM

[pic 6]

[pic 7]

[pic 8]

[pic 9]

Discusión.

Las moléculas grandes no entran en los poros de las partículas del gel y por ello eluyen rápidamente en lo que se denomina “volumen vacío” de la columna y se dicen que son excluidos del gel. 3

...

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