DETERMINACION DEL FACTOR Du (ANTÍGENO D DÉBIL) ~ Objetivo: Determinar la variante Du del factor Rh (D) mediante una prueba de aglutinación in vitro..

Laboratorio de Hematología

Práctica 5

~ DETERMINACION DEL FACTOR Du (ANTÍGENO D DÉBIL) ~

Objetivo: Determinar la variante Du del factor Rh (D) mediante una prueba de aglutinación in vitro.

Generalidades:

Aproximadamente el 1% de los individuos D-positivos tipifican como D débil (históricamente conocido como Du), caracterizado por una aglutinación débil o ausente de hematíe por anti-D durante pruebas serológicas de rutina. En los individuos D débil, el antígeno D generalmente se detecta solo con el uso de reactivo antiglobulina humana. Un fenotipo D débil puede producirse en algunas muestras de D parcial como resultado de supresión de antígeno D por dCe en trans en el fenotipo Rhmod o a través de la herencia de un alelo autosomico recesivo RhD mutante. Esto último tiene lugar para la mayoría de los fenotipos D débil presentes en la población general. Hasta la fecha, se han detectado 18 mutaciones diferentes, representando 14 alelos RHD mutantes asociadas con el fenotipo débil (contiene menos determinantes antigénicos).

Fundamento:

La prueba se basa en la demostración de un antígeno débil en la superficie de algunos eritrocitos tomados en un principio como Rh- . El sistema Rh se encuentra constituido por diversos antígenos, el antígeno D es el mas inmunogénico de todos los antígenos Rh. El antígeno D débil presenta una aglutinación débil o ausente de hematíe por anti-D.

Equipo:

Centrífuga

Baño María a 37°C

Material

1. Biológico

Sangre venosa tipo Rh negativo

1. De laboratorio

Gradilla

Tubo de ensayo de 12x75 ó 13x100

Pipetas serológicas de 5ml

Pipetas Pasteur con bulbo

Reactivos

• Albumina bovina al 22%

• Anti D

• Antiglobulina Humana (Suero de Coombs)

• Solución Salina Isotónica

Metodología

1. Tubo

1-Tomar la muestra sanguínea de un paciente tipo  Rh-(rotular la muestra).

2- Separar el paquete globular del suero ó plasma.

3- Obtener una muestra del paquete globular y lavarlo con solución salina isotónica (SSI 0.9%), por 3 veces a 2500 rpm durante 1 minuto.

4- Finalizados los lavados tomar la cantidad necesaria de eritrocitos del fondo y en un tubo de ensayo hacer una suspensión de eritrocitos al 5% con solución salina isotónica (19 gotas de SSI y 1 de eritrocitos).

5- Colocar dos gotas de la suspensión de eritrocitos problema en cada uno de los tubos marcados.

6- Añadir una gota de anti-D y una gota de albumina bovina al 22% al tubo marcado como problema y mezclar, al tubo marcado como control adicionarle dos gotas de albumina bovina al 22%, mezclar y dejar reposar Incubar 5 min o 15 min a 37°C.

7- centrifugar a 2500 rpm durante 30 segundos para buscar si hay aglutinación.

Leer aglutinación, si es negativo continuar con lo siguiente

8- Realizar tres lavados con solución salina isotónica, después del último lavado decantar completamente el sobrenadante y agregar dos gotas de antiglobulina humana (suero de coombs).

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