Electroforecis

Análisis de Electroforesis

Se agregó la muestra de estudio que consiste en una mezcla de tres aminoácidos; Ácido glutámico, Prolina y Lisina. en papel poroso en una cámara de electroforesis llena de solución buffer de boratos con un pH de 8.6. “Dependiendo del pH de la solución en la que se disolvió, los aminoácidos exhiben propiedades anfotéricas. El -NH2 puede aceptar protones (H+) para formar un catión mientras que el COOH puede donar (H+) para fromar un anión. Sin embargo a un pH específico, llamado punto isoeléctrico (pI), el aminoácido existe como un “ion dipolar” o un “zwitterion” que tiene la misma cantidad de cargas positivas y negativas en sus grupos ionizables de manera que la carga neta de la molécula es cero. En dicha situación la molécula nunca se va a mover hacia el ánodo o el cátodo al ser sujetos a un campo eléctrico. Si el pH de la solución es más baja que su pI, el aminoácido existe como un catión y viceversa si pH>pI.”

Como se muestra en la sección de cálculos, se puede deducir la migración hipotética de los aminoácidos; el punto isoeléctrico del ácido glutámico es de 3.22, menor al pH de la solución buffer (8.6) por lo que actúa como un anión(-) y migra hacia el ánodo(+). El punto isoeléctrico de la prolina es 6.3 que sigue siendo menor al pH del buffer por lo que también migra hacia el ánodo, sin embargo al ser menor la diferencia entre su pI y el pH en comparación de la diferencia del ácido glutámico, migro una menor distancia. Finalmente el pI de la lisina es 9.74, al ser un valor mayor que el pH de la solución tampón, actúa como catión(+) y migra hacia el cátodo(-). Podemos comprobar que lo mencionado anteriormente ocurrió al observar los resultados visibles en el papel filtro donde se colocó la muestra, anexado a la sección de observaciones y resultados ya que una vez terminada la electroforesis, se utilizó ninhidrina como revelador. “La revelación con ninhidrina se basa en que reacciona con todos los aminoacidos alfa cuyo ph se encuentra entre 4 y 8, además es un producto químico utilizado para detectar amoníaco o aminas primarias y secundarias, cuando se hace reaccionar con estas aminas libres, se produce un color azul o morado oscuro a violeta intenso (llamado púrpura de Ruhemann), se estabiliza por resonancia. La coloración producida por la ninhidrina es independiente de la coloración original del aminoácido. Con el fin de generar la ninhidrina cromóforo, la amina se condensa con una molécula de ninhidrina para dar una base de Schiff. Así pues, sólo amonio y aminas primarias proceden más allá de este paso. En este paso, debe haber también un protón alfa para la transferencia de base de Schiff, por lo que una amina adyacente a un carbono terciario no puede ser detectada por la prueba de ninhidrina. La reacción de ninhidrina con aminas secundarias da una sal de iminio, que

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