MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO DE CAMPO CLARO Y ELABORACIÓN DE PREPARACIONES MICROSCÓPICAS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

Elementos de competencia:

Revisar limpieza del microscopio óptico de campo claro.

Manejar correctamente el microscopio óptico de campo claro.

Aprender a enfocar en objetivos de 10X, 40X y 100X en el microscopio óptico.

Elaborar preparaciones frescas para el microscopio óptico de campo claro.

Elaborar preparaciones secas ( frotis) microscópicas.

Fundamento:

Para la observación y estudio de los microorganismos es esencial contar con un microscopio óptico compuesto, pues éste es un instrumento que amplifica la imagen de la célula microbiana que se requiere distinguir y observar, este microscopio consta de un sistema de iluminación constituido por una fuente de luz, un sistema óptico que cuenta con tres lentes (condensador, objetivo y ocular) y un sistema mecánico que lo integra y sujeta lentes y lámpara.

En microscopía óptica para lograr una buena observación se deben tomar en cuenta tres factores primordiales: amplificación, poder de resolución y contraste.

Amplificación.- A través de la refracción de los rayos de luz mediante un sistema de lentes de amplificación se forma una imagen del objeto que es mayor a la real, su valor se obtiene multiplicando el aumento del ocular por el aumento del objetivo que se esté utilizando.

Poder de resolución.- Es la máxima distancia de aproximación entre dos puntos muy cercanos que nos permite distinguirlos como entidades independientes; su valor depende de la longitud de onda de la luz empleada y de la apertura numérica de la lente del objetivo que se utilice.

Contraste.- Se debe establecer una diferencia entre los índices de refracción de la célula y el medio que nos permita distinguir la célula. Para aumentar el contraste generalmente se tiñe la célula con colorantes.

Existen cuatro tipos principales de microscopio óptico compuesto: Campo claro, campo oscuro, contraste de fases y de fluorescencia.

El microscopio de campo claro es el convencional, donde el campo microscópico esta intensamente iluminado y los objetos se observan oscuros. El aumento máximo útil que se obtiene con este microscopio es de 1400X, y su poder de resolución máximo se aproxima a 0.2 micrómetros. En microbiología éste microscopio es el más comúnmente utilizado. Las preparaciones microscópicas que se manejan son de dos tipos principales: frescas y secas. Las frescas son películas de líquido entre portaobjetos y cubreobjetos y la de gota pendiente. Mientras que las preparaciones secas son los frotis secos y fijados que generalmente son teñidos.

Material:

1. Laminillas de bacterias y hongos

2. Aceite de inmersión

3. Microscopio óptico de campo claro con objetivos de 10X, 40X y 100X.

Actividades

Observación de microorganismos al microscopio óptico

1. Encienda el microscopio óptico, abra el diafragma del mismo y con el revolver coloque en posición cada uno de los objetivos para que revise la limpieza de las lentes observando mediante el ocular.

2. Limpie con algodón las lentes sucias.

3. Coloque la laminilla que contiene el microorganismo, sobre la platina del microscopio.

4. Enfoque la muestra en objetivo de 10X, usando el macro y micrométrico.

5. Sin desenfocar la muestra, cambie a objetivo de 40X dándole vuelta al revolver, ajuste el enfoque preciso con el micrométrico.

6. Para observar en objetivo de 100X, mueva el revolver para que coloque una gota de aceite de inmersión sobre la muestra, pero no desenfoque y coloque en posición el objetivo mencionado para que enfoque utilizando el micrométrico.

7. Dibuje sus observaciones al microscopio.

8. Retire la laminilla y limpie con algodón la lente del objetivo de 100X, enfoque y observe otras laminillas,

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