Purificación de Ácidos nucleicos desde tejidos de trucha arcoíris

Introducción

El estudio molecular del ADN presenta grandes problemas desde la selección de la muestra, su purificación, extracción y la cantidad de muestra. una forma de extracción de ADN fiable fue la base para el desarrollo de las técnicas que ocupamos actualmente, cómo podría una Taq polimerasa replicar la muestra que nos interesa si está encerrada en una membrana o fue destruida por la extracción de ADN, este problema que fue solucionado hace mucho y actualmente vemos sus resultados en los Kit de extracción de ADN como el observado en la figura 1.

Figura 1: kit de extracción de ADN con todos sus reactivos y tubo de purificación.

Luego de poder lograr una buena extracción del ADN estaba el problema de cómo conseguir suficiente muestra en poco tiempo para que el trabajo se volviera eficiente. Hay apareció Kary Mullis en 1986 desarrolló la PCR y luego con el uso de geles para detección de pesos moleculares se logró facilitar y agilizar el proceso de estudio molecular del ADN.

Objetivos

● Obtención de una muestra amplificarle de ADN

● Aprender el procedimiento de extracción de ADN de muestras

● Determinación de la salud del pez

Materiales y métodos

Para la purificación de ADN del tejido se ocupó 0,036 g de hígado que anteriormente fue obtenido, este tejido fue almacenado en un tubo eppendorf de 1,5 mL y después se procedió a llenar con 200 micro litros de TL buffer obtenido del kit de PCR, para luego adicionar 25 micro litros de OB proteasa previamente reconstituida luego se procedió a mezclar con vortex para luego dejar calentando a 55° C durante 45 minutos, después de lo cual se centrifugó a 12000 rpm durante 5 minutos, después de los cuales se transfirió el sobrenadante a un nuevo eppendorf y a este le agrego 220 micro litros de BL buffer se mezcla y se dejó incubando a 70° C durante 10 minutos después de los cuales se le agrego 220 micro litros de Wash buffer, donde se mezcló hasta homogeneizar, después de lo cual se transfiere a una columna de purificación HiBind DNA con un eppendorf como receptor de líquidos, para luego centrifugar a 12000 rpm durante un minuto 2 veces retirando el líquido del eppendorf, se reemplaza el contenedor para adiciona al HiBind 500 micro litros de HB Buffer luego de esto se centrifugó a 12000 rpm durante 30 segundos 2 veces retirando el líquido del contenedor, luego se agregó 700 micro litros de Wash buffer y se centrifugó a 12000 rpm

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