Reporteinge.

OBJETIVOS

• Obtener DNA de doble cadena de los plásmidos recombinante y no recombinante derivados del PCR2.1 – TOPO.
• Obtener células competentes de E. coli y transformarlas.
• Diferenciar un vector recominante de uno no recombinante por pruebas feotípicas y de restricción.

RESULTADOS

Posterior al aislamiento de DNA plásmidico, recombinante y no recombinante a partir de la cepa  Escherichia coli DH10β por el método de la lisis alcalina, éste fue utilizado para la transformación de las células competentes obtenidas de acuerdo al protocolo establecido adicionando X-gal para evidenciar la naturaleza de las células transformadas, se obtuvieron los siguientes resultados:

Tabla 1. Efecto de la transformación de células de E. coli DH10β  con plásmidos PCR 2.1 TOPO (no recombinante) y PCR 2.1-TOPO-ape (recombinante).

[pic 1]Estas fueron las colonias observadas:

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Así mismo tras la restricción del DNA de los plásmidos utilizados, con las enzimas Bam HI y Eco RI, se realizó un electroferograma; para ello utilizamos 2 marcadores distintos λ y M1Kbp, que podemos observar en la imagen siguiente[pic 13][pic 14]

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Se tomaron en cuenta las distancias recorridas donde se encontraban cada uno de los fragmentos con el fin de interpolar posteriormente en las gráficas de cada marcador dicho valor y así conocer el valor del tamaño molecular de cada uno.

Tabla 2. Resultados y cálculos obtenidos en la electroforesis con respecto al marcado 1kpb.

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