Tecnicas Empleadas En El Estudio De Microorganismos

Practica numero#2 : tinción diferencial y observación en vivo de organismos unicelulares.

Objetivo 1: conocer el procedimiento de la tinción diferencial para aplicarlo en los laboratorios.

Objetivo 2: observar microorganismos en vivo para reconocer los orgánulos que los conforman.

Materiales:

• Microscopio óptico.

• Asa de inoculación.

• Mechero de bunsen.

• Tubos de ensayo.

• Rejilla para tubos de ensayo.

• Porta objetos.

• Agua destilada.

• Lugol.

• Etanol.

• Azul de metileno.

• Safranina.

• Cubre objetos

Metodología:

Practica numero 1

1° paso: tomamos la muestra para diluirla con la ayuda de un asa de inoculación para ponerla en el tubo de ensaye.

2° paso: ponemos la muestra fecal en el tubo de ensaye y agua destilada (H2O) y procedemos a disolver con el asa de inoculación hasta obtener una solución desintegrada lo más posible.

3° paso: una vez obtenida la mezcla disuelta se deja reposar un momento en la rejilla para tubo de ensaye, hasta lograr una decantación.

4° paso: colocamos en el portaobjeto con ayuda del asa de inoculación una pequeña muestra de la superficie del agua y esparcimos correctamente sobre el portaobjetos.

5° paso: la muestra se seca al aire hasta que el porta objetos quede como empañado después se procede a fijar pasando lo por el mechero de bunsen para que se pueda observar sin movimiento y sean más notorias las bacterias.

6° paso: después de secado aplicamos el colorante básico (violeta de genciana) esparcimos por toda la muestra cuidadosamente y dejamos actuar 3 minutos para que la tinción sea la correcta.

7° paso: la muestra se enjuaga con agua destilada (H2O) cuidadosamente para poder retirar el exceso dé colorante, y procedemos a secar al aire únicamente.

8° paso: después de secado procedemos a aplicar Lugol (yodo) con un gotero o una pipeta durante 3 minutos para hacer una mejor distinción de las células (cubrir diferencias).

9° paso: nuevamente enjuagamos con agua destilada para quitar el exceso de solución y secamos al aire libre nuevamente.

10° paso: aplicamos etanol (alcohol) al 95% sobre la muestra para fijar los colorantes, el etanol es de secado rápido debido a esto no es necesario esperar.

11° paso: aplicaremos el segundo colorante (safranina) a nuestra muestra con ayuda de una pipeta la dejamos accionar durante 3 minutos y aclaramos con agua destilada y procedemos a secar.

12° paso: una vez terminada la muestra la colocamos en el microscopio con ayuda de las pinzas sujetamos la muestra en la platina, ajustamos a X50 el objetivo, y para graduar a nuestra vista ajustamos con el macro métrico y el micrométrico.

13° paso: por ultimo procedemos a observar la muestra y si todo salió bien podrá observar los organismos diferenciando sus partes gracias a la tinción diferencial.

Conclusion: en esta ocasión pudimos observar la diferencia entre las células gram positivas (color violeta) y las células gram negativas (color rojo)por consiguiente entendimos que hay diferencias entre las células ya que pudimos

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