Turbidimetria

Universidad Central del Ecuador

Facultad de Ciencias Químicas

Escuela de Bioquímica y Farmacia

Nombre: María Fernanda Bustos Matuhura

Grupo: B6

Fecha: 18 de abril de 2011

CONSULTA

Dispersión de la Luz

Cuando un haz de luz paralelo (colimado) golpea una partícula en suspensión, parte de la luz es reflejada, parte es diseminada, parte es absorbida y parte es transmitida. La nefelometría mide la luz dispersada por una solución de partículas. La turbidimetría mide la luz dispersada como un decrecimiento de la luz transmitida a través de la solución. Con relación a la longitud de onda y al tamaño de la partícula pueden existir tres tipos de dispersión.

Los cultivos bacterianos actúan como suspensiones coloidales absorbiendo y reflejando la luz que incide sobre ellos, por ello, una suspensión bacteriana aparece turbia a simple vista. Dentro de un rango, la luz absorbida o dispersada por una suspensión bacteriana es directamente proporcional a la concentración de células en el cultivo. Por ello, un procedimiento rápido, fácil y preciso de estimar el número de bacterias en un cultivo es la medida de turbidez. El espectrofotómetro es el aparato que se utiliza para medir la turbidez. Este aparato proporciona luz monocromática por medio de un filtro que permite sólo el paso de la longitud de onda elegida (normalmente las longitudes de onda usadas para medir la turbidez bacteriana están en el rango 540 – 660 nm).

DENSIDAD ÓPTICA

La cantidad de luz incidente absorbida por una suspensión bacteriana es medida por una célula fotoeléctrica y se expresa como absorbancia o densidad óptica. Así la absorbancia se define como la proporción de luz incidente absorbida por una suspensión y se puede calcular como: la luz absorbida / luz incidente.

TURBIDIMETRIA

La turbidimetría mide la reducción de la transmisión de luz debido a partículas de una suspensión y cuantifica la luz residual transmitida.

Estudios teóricos y experimentales han mostrado que soluciones diluidas de diferentes tipos de bacterias, independientemente del tamaño celular, tienen casi la misma absorbancia por unidad de concentración de peso seco. Esto quiere decir que, en soluciones diluidas, la absorbancia es directamente proporcional al peso seco, independientemente del tamaño celular del microorganismo.

Sin embargo, se encuentran absorbancias muy diferentes por partícula o por UFC (Unidad Formadora de Colonia) cuando los tamaños de las células bacterianas son diferentes. Por esta razón, para estimar el número de microorganismos totales o el número de microorganismos viables de una suspensión bacteriana debe realizarse una "curva de calibración" con cada tipo de microorganismo, sólo de esta forma es posible relacionar Absorbancia (Densidad Óptica) con el número de microorganismos totales o con UFC.

Absorbancia en función del Peso Seco

Absorbancia = K x Peso Seco

K: constante que varía con la longitud de onda utilizada y representa la inversa del peso seco del microorganismo que produce un aumento de 10 veces en el valor de la absorbancia (1/W0).

Peso seco: Concentración celular bacteriana expresada en unidades de peso seco (µg/ml-mg/ml).

VENTAJAS Y DESVENTAJAS

Para el manejo práctico de los cultivos bacterianos en estudios de turbidimetria es muy útil el uso de matraces con brazo lateral, ya que permiten la realización de medidas sin necesidad de abrir los matraces y de tomar muestras del cultivo, evitando así el riesgo de contaminación por la manipulación.

Hay que tener en cuenta que existe un límite de detección en cultivos con concentraciones inferiores mínimo de detección con concentraciones inferiores a 106 UFC/ml no presentan turbidez detectable

La

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