Селективное окрашивание

RESUMEN: es necesario aplicar técnicas especiales de tinción para poder observar la capsula de las bacterias, la capsula es la capa rígida con borde definido formada por una serie de polímeros orgánicos que en las bacterias se depositan en el exterior de su pared celular. Para la visualización de la capsula se conocen varias técnicas, entre ellas, la de Anthony y la de tinta china, que son los desarrollados en la práctica.

PALABRAS CLAVE: Tinción, cápsula, coloración

INTRODUCCIÓN: Los procedimientos que ponen de manifiesto diferencias entre las células bacterianas o en partes una célula se conoce como técnica de coloración diferencial. Son algo más que elaboradas que la técnica simple en la que las células se someten a una sola solución colorante o reactivo colorante.

Las tinciones se combinan químicamente con el protoplasma bacteriano; si la célula no ha muerto el proceso termina de hacerlo. El método, por consiguiente, es bastante drástico y puede producir artificios.

Las tinciones más frecuente son sales. Las tinciones básicas consisten en un catión coloreado unido a un anión incoloro, mientras las ácidas constituyen exactamente lo contrario, unido a dos cationes. Las células bacterianas son abundantes en ácidos nucleicos, los cuales portan cargas negativas en formas de fosfatos.

Los colorantes ácidos no tiñen a las células bacterias, y por tanto, pueden utilizarse para teñir al fondo con un color de contraste.

Las tinciones básicas tiñen uniformemente en las células bacterianas, a menos que antes destruyan el ARN del citoplasma. También se pueden usar técnicas de tinción especiales para flagelos, membranas celulares, paredes celulares, gránulos, nucleótidos y esporas.

En este informe veremos los resultados obtenidos con la tinción de cápsula, la cual consiste en que la cápsula se pone de manifiesto mediante una coloración negativa o una modificación de esta. Uno de los métodos de “tinción de la cápsula” incluye el tratamiento de las bacterias con un solución caliente de cristal violeta seguido por un lavado con una solución de sulfato de cobre. El sulfato de cobre también imparte color al fondo y esto resulta en que la célula y el fondo aparezcan teñido en color azul oscuro mientras la cápsula aparece de color azul pálido.

MATERIALES Y MÉTODOS:

RESULTADOS:

TINCION DE ANTHONY (Klebseilla pneumoniae): Al observar con el objetivo de 4X vemos unas figuras irregulares de color morado suave. Con el objetivo de 100X observamos la bacteria muy pequeñita con relación a la capsula, la bacteria de color de morado oscuro y la capsula de morado suave casi rosado.

Luego del montaje al microscopio óptico, se observaron bacilos, en el método de tinción de Anthony la muestra de bacterias Klebsiella dio un resultado positivo ya que se observaron dos tonalidades en la bacteria esto se debe a que las capsula no permite la adhesión de partículas por lo cual se alcanza a ver morado suave mientras que la bacteria que se encuentra rodeado de esta estructura que le ayuda a protegerse de la fagocitosis y a la acumulación de alimento entre otras funciones se tiñeron de un color morado oscuro lo cual comprueba que en esta muestra se encontraban bacterias con capsulas.

Finalmente podemos mencionar que a pesar que la bacteria es una estructura muy pequeña, por medio de la tinción, el cual requirió del calor para la penetración; se pudo observar la estructura interna de la célula bacteriana, particularmente las endosporas. Observamos que se coloreo toda la célula excepto la espora que se observa de un tamaño bien aceptable.

PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS:

1. Explique el fundamento de la tinción negativa realizada en la práctica.

La tinción de cápsula se denomina tinción negativa porque tiñe el fondo de la preparación y no el microorganismo. Desde el punto de vista formal no es una tinción propiamente dicha, porque no fija los microorganismos. Se parece más a una preparación en fresco. Su realización es sencillísima, consiste en colocar la muestra húmeda sobre el portaobjetos y mezclarla con tinta china. La tinta cubre toda la preparación a excepción de las cápsulas. En el microscopio se observa el fondo negro y los microorganismos con cápsula sin color.

La tinción negativa es el reverso del procedimiento de tinción usual: las células se dejan sin teñir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las células. La sustancia utilizada para la tinción negativa es un material opaco que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las células, tal como la tinta china (que

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