Histology Tecnica

COLORACION DE HEMATOXILINA -EOSINA (H&E) La coloración de hematoxilina - eosina se considera como la técnica de tinción de uso más frecuente en el estudio de células y tejidos, a través del microscopio fotónico. Consiste en la tinción de:

a) los núcleos mediante una hematoxilina, previamente oxidada y transformada en hemateina a la que se le añade una sustancia mordiente para formar una laca (para tal fin se usan sales metálicas de aluminio, plomo o fierro). Los núcleos se colorean de azul, azul morado, violeta, pardo oscuro o negro, dependiendo de los agentes oxidantes y mordientes que se utilizaron.

b) el citoplasma y material extracelular utilizando la eosina que les confiere diversos grados de color rosado.

El procedimiento de coloración de H & E es el siguiente:

1. Desparafinar los cortes en

- xilol -------------------------- 3 minutos - xilol -------------------------- 3 minutos

2. Hidratar los cortes en baños decrecientes de alcohol

- alcohol absoluto (100o) ------3 minutos - alcohol absoluto (100o) ------ 3 minutos - alcohol de 95o ---------------- 3 minutos - alcohol de 95o ----------------- 3 minutos - alcohol de 70o ----------------- 3 minutos - agua corriente ----------------- 5 minutos. - agua destilada (2 baños)-------1 minuto (cada uno)

3. Colorear con la solución de hematoxilina. En este paso es conveniente respetar el tiempo de coloración que recomienda cada tipo de solución de hematoxilina. Dependiendo de la fórmula de preparación el tiempo puede variar de 3 a 20 minutos.

La hematoxilina de uso más frecuente es la hematoxilina alumínica de Harris -------3 a 5 minutos

4. Lavado en agua destilada (2 baños)------un minuto cada uno.

5. Diferenciar, para eliminar el exceso de colorante, se emplea el alcohol ácido, hasta que los núcleos y los componentes basófilos de las células sean lo únicos que permanezcan teñidos

- lavar en agua corriente----------------- 2 minutos

6. Virar al color azul, empleando soluciones de:

 Sustancias alcalinas como agua amoniacal

 Solución de bicarbonato de sodio al 2%

 Carbonato de litio al 1%.

- lavar en agua corriente -------------------- 5 minutos - lavar en agua destilada (2 baños ) -------1 minuto c/u.

7. Colorear con una solución alcohólica o acuosa de eosina------------------------------------------ 3 a 5 minutos

8. Deshidratar en baños crecientes de alcohol etílico

- alcohol de 70o ------------------------------- 1 minuto - alcohol de 95o -------------------------------1 minuto - alcohol de 95o --------------------------------1 minuto - alcohol absoluto (100o ) --------------------1 minuto - alcohol absoluto (100o) ---------------------2 minutos

9. Diafanizar o aclarar empleando xilol

- xilol ------------------------------------------- 1 minuto - xilol ------------------------------------------- 2 minutos En estas condiciones los tejidos están preparados para realizar en ellos el montaje. Fig Tec de Tinción: gamas de color del método de tinción H&E

F) MONTAJE.

Concluido el proceso de la tinción de los cortes, éstos se deben colocar en condiciones de protección y de poderlos utilizar infinidad de veces sin que se deterioren. Para alcanzar tales propósitos se recurre al último procedimiento que es el montaje. Este procedimiento consiste en colocar encima del corte coloreado y diafanizado una gota de una sustancia adherente, diluida, generalmente en xilol (resina natural como el bálsamo de Canadá o resinas sintéticas, cuyos índices de refracción son similares a los del vidrio) y encima de ellos, una laminilla cubreobjetos, cuidando que no queden burbujas de aire entre la resina. A continuación se deja que el xilol se evapore, y la resina adquiera solidez suficiente; para ello las láminas se colocan en

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