Cromatografia

Cromatografía

El proceso de cromatografía fue descubierto en 1903 por MiKhail Tswett, quien separo pigmentos vegetales en solución por medio de la utilización de adsorbentes solidos. En la mayoría de los procesos cromatograficos modernos, una mezcla de sustancias que se fraccionara se disuelve en un liquido y se percola a través de una columna que contiene una matriz solida porosa.

Fundamento

La tendencia a solubilizar las moléculas de soluto por parte del solvente, a la larga, habrá de imperar sobre las fuerzas de retención del relleno de la columna, consiguiendo, antes o después, arrastrar ese soluto disuelto, hasta salir con el al exterior de la columna, proceso que se denomina elución.

La fase interna de la columna se denomina fase fija , mientras que la fase liquida que supone el solvente se llama fase móvil.

Clasificación de la cromatografía

Existen muchas maneras de clasificar los métodos cromatográficos, según su fase móvil se clasifica en dos sistemas, gas- líquido y gas-sólido y Cromatografía líquida donde el eluente es un líquido y puede ser líquido-liquido, liquido-sólido.

Cromatografía de filtración en gel

En este método las moléculas se separan de acuerdo con su forma y su tamaño. La fase estacionaria esta formada por esferas de gel que contiene poros de un rango de tamaño relativamente estrecho.

Cromatografía por exclusión

El principio de la separación es el siguiente: el material que llena la columna está formado por partículas con poros de un cierto intervalo de tamaños. Las moléculas mayores que los poros no pueden entrar en ellos, por lo que avanzan pr la columna con mayor rapidez que las de tamaño menor.

Cromatografía de interacción hidrófoba

Las interacciones hidrófobas entre las proteínas y la matriz pueden aprovecharse para purificar estas moléculas. El material de la matriz esta ligeramente sustituido con grupos octilo o fenilo. A altas concentraciones de sales los grupos no polares interactúan con los grupos hidrófobos, es decir son excluidos por el solvente polar.

Cromatografía de afinidad

La Cromatografía de Afinidad permite la separación de mezclas proteicas por su afinidad o capacidad de unión a un determinado ligando. En este caso, las proteínas que se retienen en la columna son aquellas que se unen específicamente a un ligando que previamente se ha unido covalentemente a la matriz de la columna.

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