Cromatografia

CROMATOGRAFÍA DE AMINOÁCIDOS EN PAPEL

INTEGRANTES:

INTRODUCCIÓN

La cromatografía es un método de separación en donde los componentes de una mezcla se separan en base a una distribución diferente entre la fase móvil y la fase estacionaria. El movimiento relativo de las moléculas a lo largo del sistema cromatográfico es el resultado de un equilibrio entre las fuerzas de transmisión o arrastre ejercido por la fase móvil en su desplazamiento sobre la fase estacionaria y las fuerzas que tienden a frenar dicho desplazamiento se utiliza para compuestos muy polares o polifuncionales.

MATERIAL REACTIVOS

Cámara cromatografica (frasco de vidrio) Aminoácidos a 0.05M (prolina, serina, lisina y leucina)

Papel Cromatográfico (16cm X 18cm) Solvente(n-butanol, ácido acético glacial, agua)

Capilares Solución de Ninhidrina

Estufa (90` C) Hidróxido de amonio concentrado

Regla

Lápiz

METODOLOGÍA

1.- El papel a utilizar debe tener un tamaño de 16 por 18 cm marcar una línea a 2 cm de altura que será el origen es decir el lugar para aplicar la muestra problema. Y marcar 5 puntos sobre la línea a una longitud proporcional y rotularlos con la inicial del aminoacido.

2.- Aplicar la muestra problema con un capilar en cada punto y el último punto va a tener la mezcla de todos los aminoácido ya mencionados (prolina, serina, lisina, leucina) la cantidad debe ser pequeña.

3.- Colocar el papel cuidadosamente en una cámara cromatografica (frasco de vidrio) que ya contenga el solvente (20ml), y esperar 30 min aprox. para que el papel adsorba el solvente y marcar la altura máxima donde ascendió el solvente.

4.- Dirigirse a la campana de extracción con la cámara cromatografica cerrada para posteriormente abrirla dentro de la misma e ir secando por aeración el papel.

5.-Pasar el papel por la boquilla de hidróxido de amonio concentrado para neutralizar los aminoácidos.

6.-Rocie el revelador de ninhidrina sobre el papel y secar unos minutos.

7.-Llevar el papel cromatográfico a la estufa y esperar 2 minutos.

8.-Se mide la distancia desde la línea de aplicación de las muestras hasta cada mancha y se calculan los valores del factor de resolución (Rf) para cada aminoácido.

OBSERVACIONES

No se debe permitir que se adsorba mucho solvente pues la aplicación se vuelva muy

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