EQUILIBRIO DE FASES

Metodología

La materia prima (rizomas de jengibre orgánico fresco) utilizada fue donada por la Universidad Autónoma del Estado de Hidalgo (UAEH), misma que se obtuvo por la empresa Productores Orgánicos de Black Berry de la Sierra Norte de Puebla, S.C de R.L. Los rizomas de jengibre se seleccionaron al azar, con características comunes entre ellas (textura, tamaño, color y sin daños mecánicos), después de la selección se le da un tratamiento para su conservación. 

Para la obtención de los extractos acuosos de jengibre se utilizaron 14 porcentajes diferentes de materia prima: 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%,35%, 40%, 45%, 50%, (peso/volumen). Bajo condiciones asépticas se licuó durante 5 minutos un 1Kg de jengibre previamente seleccionado en una licuadora comercial(Oster) hasta obtener un tamaño de partícula de 1 a 5mm. Posteriormente se adicionó 50mL de agua a temperatura ambiente (25-28°C), se homogeneizó en un tiempo de 7 minutos. La muestra obtenida se filtró a vacío utilizando tela de lino, el sobrenadante se almacenó en viales, estos fueron cubiertos con papel aluminio (Alumex) y llevados a un refrigerador (Whirlpool) a aproximadamente 7°C hasta su análisis. Para la obtención de los aceites esenciales del rizoma de jengibre, se extrajo con solventes orgánicos (acetona (Hycel), éter de petróleo (Realyt´s), acetato de etilo (Realyt´s), diclorometano (Realyt´s), etanol (Realyt´s) y hexano (J.T. Baker).

A continuación, una columna cromatográfica (30X3 cm, silica gel), con 240gr de jengibre (molido), se eluyeron con 200mL por cada solvente orgánico. La elución se almaceno durante 7 días a temperatura ambiente. Una vez obtenida la fase oleosa se colocó en matraces de fondo plano. Finalmente, el solvente fue eliminado usando un rota-vapor SEV-PRENDO (T de evaporación de cada disolvente, rotación de 80rpm y presión a vacío de 72 mbar). Una vez eliminado el solvente, se agregaron20mL de glicerol (Drogueria cosmopolita) para resuspender el extracto.   La fase oleosa se almacenó en viales ámbar a temperatura ambiente hasta su análisis.

Los microorganismos empleados fueron cepas de Escherichia coli (EC-199, EC388, EPEC MAC y ETEC 1) las cuales fueron proporcionadas por el laboratorio de Microbiología en Alimentos del Área de Química de la Universidad Autónoma del Estado de Hidalgo (UAEH), las cepas se mantuvieron a 4 – 7°C en agar base sangre (ABS, Merck, Alemania) con transferencias quincenales, activándose en caldo soya tripticaseína (CST, Bioxon, México) con incubación a 35°C/24h.

Se subcultivarón los patógenos en caldo lactosado con extracto de levadura, transfiriendo 100μL de la cepa original al caldo, se dejó incubar a 37°C/18h. Pasado el tiempo de incubación se ajustó la concentración del microorganismo con solución fisiológica (Gimequim) a 1.5 x108 ufc/mL utilizando como estándar 0.5 en escala de McFarland (Remel)

La actividad antimicrobiana de los extractos de jengibre se determinó siguiendo el método de difusión de pozos (Wayne, 1997; Frobisher et al. 1974).

Se vertieron 100µL de Escherichia coli (EC-199, EC-388, EPEC MAC Y ETEC 1) en placas Petri para cada uno de los extractos, estándares y blancos por triplicado, a continuación, se le adicionó agar Mueller Hinton (Bioxon), una vez solidificado, se perforaron cuatro pocillos de 5mm de diámetro con pipetas Pasteur estériles en las placas de agar inoculadas, luego se colocó directamente en los pocillos un volumen de 50µL de cada extracto, las placas se dejaron en reposo durante 10 minutos. Posteriormente, se incubaron y leyeron las placas. Los ensayos se realizaron por triplicado.

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