MLTS DE CANDIDA

INFORME

Moñitos córdoba

Se procesaron las siguientes lutzomyias (hembras alimentadas)

SE tomo un espécimen de cada vial y se realizó extracción con el kit  ZR tissue & Insect DNA MicroPrep. ZYMO RESEARCH® según protocolo.

Se realizó medición en NAnodrop obteniendo los siguientes resultados.[pic 1]

Según los resultados obtenidos la concentración de ADN no es la esperada, por tal razón se realizo lectura de artículos relacionados con metodología de extracción de ADN de flebotomíneos  para obtener mejor concentración de ADN, se determinó cambiar el buffer de lisis del kit y preparar buffer de lisis casero dejando cada espécimen por 3 horas a 65°C (Rosero et al., 2010).

NaCl 0.1 M

EDTA 0.05 M

SDS 0.5%

Tris-HCL 0.1 M

pH 9.1

Se realiza ensayo con el kit ZR tissue & Insect DNA MicroPrep. ZYMO RESEARCH®  y High Pure PCR Template Preparation Kit, Roche® obteniendo los siguientes resultados (4-1 a 4-8 con Zymo y de 4-1a a 4-8a con Roche):

[pic 2]

Se establece utilizar el buffer de lisis casero con las modificaciones en el protocolo de extracción.

Se realiza extracción de 3 lutzomyias hembras alimentadas

Gel infección utilizando el marcador molecular kDNA (ADN del kinetoplasto) Banda de interés 120 pb

[pic 3]

Se realiza electroforesis de las 11 muestras, Control positivo: Leishmania amazonensis

Resultado: Positivo para Leishmania spp muestras 4-10 y 4-11.

GELES FUENTE SANGUINEA

MAMIFERO

[pic 4][pic 5][pic 6][pic 7]

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