PLASMINOGENO

2.1 PLASMINÓGENO

Es una glicoproteína monocatenaria compuesta por 790 aminoácidos y 24 puentes disulfuro con un contenido en carbohidratos del 2% y un peso molecular (Pm) de 92.000 daltons, sintetizándose en el hígado; su concentración plasmática es de 2mM (20 mg/dl) y su vida media de 2,2 días.

El gen que codifica esta proteína está localizado en el cromosoma 6. En su forma nativa el plasminógeno contiene ácido glutámico en posición amino-terminal (Glu-plasminógeno), pudiendo ser convertido por pequeñas cantidades de plasmina a formas con lisina, valina o metionina en dicha posición, denominadas Lis-plasminógeno, los cuales poseen mayor afinidad por la fibrina y se activan más fácilmente por los activadores fibrinolíticos (6, 7).

En la región amino-terminal existen cinco estructuras denominadas “kringles” -anillos- a cuyo nivel se sitúan los lugares de fijación de lisina (LBS, “lysine binding sites”) que van a ser los lugares por los que el plasminógeno va a unirse específicamente a la fibrina. También van a mediar la interacción del plasminógeno con la alfa2-antiplasmina y, por tanto, van a jugar un papel fundamental en la regulación de la fibrinolisis (3, 8, 9). Además el plasminógeno se une a través de los LBS a la célula endotelial lo que favorece su activación a nivel local.

2.2 ACTIVADORES DEL PLASMINÓGENO

La activación del plasminógeno a plasmina tiene lugar por escisión del enlace Arg561-Val562 en la molécula del Glu-plasminógeno por acción de los diferentes activadores. La plasmina así formada es una serín-proteasa bicatenaria compuesta por una cadena pesada derivada de la porción amino-terminal, que contiene 560 aminoácidos y 5 “kringles” en donde se localizan los LBS, y una cadena ligera derivada de la posición carboxi-terminal compuesta por 241 aminoácidos, que contiene el centro activo formado por los aminoácidos serina, histidina y ácido aspártico (10). En la actualidad se distinguen varias vías de activación expuestas en la Fig. 2.

2.2.1 Activación intrínseca del plasminógeno:

Fue denominada inicialmente activación por contacto o XII-dependiente por estar implicados diversos factores del sistema de contacto de la coagulación. Actualmente se sabe que además del factor XII existen otras sustancias en la sangre, denominadas precursores, como la precalicreína o el quininógeno de alto peso molecular (HMW-K) que pueden inducir la activación del plasminógeno (Fig. 2). La activación del factor XII conduce a la generación de calicreina que va a ser un potente activador de la fibrinolisis intrínseca. Actualmente se ha demostrado que la calicreina puede activar una forma proenzimática de la UK, habiéndose sugerido que éste podría ser el principal mecanismo de activación de la fibrinolisis intrínseca (11).

2.2.2 Activador tisular del plasminógeno (t-PA):

El t-PA en su forma nativa es una proteasa serínica monocatenaria constituida por 530 aminoácidos y un Pm de 68.000 daltons la cual puede ser convertida en una molécula de doble cadena por acción de la plasmina. La cadena pesada A (1-278aa) contiene dominios homólogos a los encontrados en otras proteínas: una región homóloga a la de la fibronectina, denominada dominio “finger”, una estructura similar al factor de crecimiento epidérmico (dominio-EGF, “epidermal growth factor”) y dos “kringles” similares a los del plasminógeno. El centro activo está localizado en la cadena ligera B(279-530aa) y contiene los aminoácidos serina, histidina y ácido aspártico, de forma semejante a otras proteasas como trombina, plasmina y elastasa.

Cada una de las estructuras anteriores tiene su función: la fijación del t-PA a la fibrina se hace a través de los dominios “finger” y “kringle” 2, la formación de complejos inactivos entre el t-PA y su inhibidor específico es debida a una interacción con el centro activo y la eliminación del t-PA de la circulación a través del hígado, lo que supone el reconocimiento por parte del receptor hepático del dominio EGF (12). La principal vía de eliminación del t-PA es a través del hígado, siendo su vida media de 5 minutos. Su concentración plasmática es aproximadamente de 1-6ng/ml. l t-PA es sintetizado por las células endoteliales y liberado a la circulación por diversos estímulos. Por tanto, la actividad fibrinolítica plasmática puede aumentar o disminuir dependiendo de una serie de factores (tabla II).También se ha sugerido que la secreción de t-PA estaría modulada por una hormona peptídica central; sin embargo, no se ha podido identificar esta hormona en extractos de hipotalamo e hipófisis (12).

Por lo que se refiere a su mecanismo de acción, posteriormente será explicado con mayor detalle, pero habría subrayar que una propiedad importante del t-PA es su gran afinidad por la fibrina.El t-PA es una enzima débil en ausencia de fibrina, mientras que ésta estimula significativamente, aprox. 1.000 veces, la activación del plasminógeno y la formación de plasmina, lo que se ha explicado por la formación de un complejo ternario entre el t-PA y el plasminógeno a nivel de la superficie de la fibrina, que induciría un cambio de conformación de la enzima y el sustrato, lo que favorecería la formación local de plasmina y la degradación de la fibrina “in situ” (13) (Fig. 3).

2.2.3 Activadores tipo uroquinasa (UK) y prouroquinasa (u-PA y scu-PA):

La UK es una proteasa serínica similar a la tripsina, compuesta por dos cadenas polipeptídicas de 20.000 y 34.000 daltons unidas por un puente disulfuro; fue aislada inicialmente a partir de orina humana y cultivo de células embrionarias de riñón humano. Es un activador directo del plasminógeno mediante escisión de un enlace Arg561-Val562 con formación de Glu-plasmina pero, a diferencia del t-PA, carece de afinidad específica por la fibrina, ya que activa indiscriminadamente tanto al plasminógeno circulante como al unido a la fibrina (Fig. 3).Tanto su mecanismo de acción como sus características farmacocinéticas serán revisadas en profundidad más adelante.

En 1973 se sugirió la existencia de un precursor inactivo de la UK, denominado prouroquinasa o scu-PA, presente en orina, plasma, cultivo de células normales y tumorales y, en la actualidad, obtenido por ingeniería genética con técnicas de DNA recombinante.

La prouroquinasa es una glicoproteína monocatenaria compuesta por 411 aminoácidos y un Pm de 54.000 daltons. La porción amino-terminal contiene una región homóloga al factor de crecimiento epidérmico y otra similar a los “kringles” del plasminógeno, pero a diferencia del t-PA no posee un dominio “finger”,

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