Preparacion De DNS

La determinación de azucares reductores se realiza utilizando el método calorimétrico de Acido Dinitrosalicílico (DNS). Este método se selecciona por ser rápido y reproducible.

La concentración se obtiene a partir de la recta obtenida al realizar la curva de calibración, que correlaciona la Absorbancia medida a 540 nm con la concentración de Glucosa. Los patrones son preparados con D-Glucosa de Merck.

Procedimiento de preparación del reactivo DNS

▪ Pesar 4 g de NaOH y Disolverlos de 250 mL de agua destilada y 75 g de Tartrato de Sodio y potasio.

▪ Agregara 2,5 g de DNS, bajo calentamiento a baño de Maria.

▪ Aforara 500 mL con agua destilada.

▪ Almacenar a temperatura ambiente y proteger de la Luz

Procedimiento para la determinación de azucares reductores

▪ Agregar 1 mL de reactivo a 1 mL de muestra usando tubos tapa rosca.

▪ Poner en calentamiento durante 5 minutos en baño de agua

▪ Detener la reacción en un baño con Hielo

▪ Agregar 10 mL de agua destilada y dejar en reposo 15 min.

▪ Medir la Absorbancia óptica a 540 nm contra el blanco obtenido en el procedimiento anterior (para este blanco se agrega agua destilada en lugar de muestra).

Procedimiento de Elaboración de la recta de Absorbancia Vs concentración de azucares reductores.

Preparación de patrones

Tomar solución de 1 g/l de Glucosa

Aforar 10 mL, llevar a frasco de tapa rosca

Tomar muestra de 8 mL y aforar a 10 mL con agua destilada

Tomar Volumen de 6 mL y aforar a 10mL con agua destilada

Tomar Volumen de 4 mL y aforar a 10 mL con agua destilada

Tomar Volumen de 2 mL y aforar a 10 mL con agua destilada

Se desarrolla el procedimiento de azucares reductores, tres veces para asegurar la reproductividad de los datos.

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