Ram Recuento

RAM

RECUENTO DE COLONIAS

Placas normales 25 – 250 colonias

 Seleccionar las placas libres de crecimiento invasivo

 Contar todas las colonias, incluyendo las de tamaño muy pequeño

 Anotar el Número de colonias contadas en cada placa, de cada una de las diluciones

Casos especiales

Si no se tienen placas que cumplan con el requisito anterior, proceder de la siguiente manera:

a) Placas sobrepobladas (más de 250 colonias)

Anotar los recuentos de placas sobrepobladas como muy numerosos para contar (MNPC),

cuando se dispone de placas normales en otras diluciones.

Si no se dispone de placas normales en las diluciones sembradas, contar las colonias en

sectores de la placa si su distribución es homogénea y calcular el recuento estimado en placa

(RPES) por estar fuera de los límites 25 y 250.

Si hay menos de 10 colonias por cm2, contar colonias en 12 cuadrados, seleccionar 6 cuadrados

consecutivos en la placa en forma horizontal y 6 cuadrados consecutivos formando angulo

recto. Contar cada cuadrado sólo una vez.

Si hay más de 10 colonias por cm2 contar las colonias en 4 cuadrados. En ambos casos,

multiplicar el número promedio de las colonias contadas por cm2, por el área de la placa

usada, para estimar el número de colonias por placa.

Si hay más de 100 colonias por cm2, registrar como >100 col/cm2.

b) Placas con menos de 25 colonias (<25 colonias)

Cuando las placas tienen menos de 25 colonias proceder como en el punto uno.

c) Placas sin desarrollo de colonias

Cuando ninguna de las placas presente desarrollo de las colonias, registrar como sin desarrollo

en la dilución correspondiente (SD).

En tal caso el analista puede sospechar la presencia de sustancias inhibidoras en las muestras

que están siendo analizadas, cuando las placas no tienen crecimiento o proporcionalmente

tienen menos crecimiento en las diluciones más bajas. Tal resultado no debería ser

interpretado como evidencia de inhibidores hasta confirmar la presencia de ellos en el

producto.

d) Crecimiento invasivo

Las colonias invasivas son generalmente de tres tipos:

 El primer tipo son las colonias en cadenas, que al parecer son causadas por desintegración

de un grupo de bacterias, cuando la placa de Petri es rotada para mezclar la alícuota

analizada.

Si solamente aparece una cadena, se cuenta como una sola colonia.

Si una o más cadenas parecen originarse de fuentes distintas, contar cada fuente como una

colonia.

 El segundo tipo de colonia invasora es la que se desarrolla en una película de agua entre el

agar y el fondo de la placa de Petri.

 El tercer tipo es la que se forma en una película de agua en el costado o en la superficie del

agar.

Estos dos últimos tipos revelan una acumulación de humedad en el punto en el cual se inicia el

crecimiento invasivo.

Cuando la alícuota de siembra es uniformemente distribuida en el medio, las bacterias

realmente desarrollan colonias invasivas.

Si en las placas seleccionadas se presenta invasión, realizar recuento de colonias solamente:

 Si el área invadida no excede la mitad de la placa.

 Si las colonias están bien distribuidas fuera del área invadida.

Si no se cumple lo anterior, registrar como crecimiento invasivo o accidente de laboratorio.

Si se presentan con frecuencia placas con crecimiento invasivo, se recomienda tomar medidas

inmediatas para eliminar este problema: reducir la humedad ambiente en la incubadora y

mezclar cuidadosamente el agar con el inóculo.

e) Accidente de laboratorio

Cuando una placa presenta contaminación u otra condición insatisfactoria registrar como

“Accidente de laboratorio” y especificar.

NOTA: Se recomienda utilizar para el registro el siguiente esquema:

Placa 1 Placa 2

10-1

10-2

10-3

10-4

10-5

10-6

CÁLCULO Y REGISTRO DE RESULTADOS

Placas normales

 Cuando

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