Tecnica De La Lipasa

Tecnica LIPASA

Método enzimático colorimétrico

FUNDAMENTO

El método está basado en la segmentación del cromógeno específico sustrato ácido 1,2-O-dilaurylrac-glicero-3-glutaric- (6’methyl-resorufin)-ester emulsionado en micro-partículas estabilizante. En presencia de activadores específicos de la lipasa pancreática como colipasa, iones de calcio y ácidos biliares, el sustrato se transforma en ácido 1,2-O-dilauril-rac-glicerol y glutárico-6'-methylresorufinester que se descompone espontáneamente a ácido glutárico y metilresorufina. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de lipasa en la muestra.

MATERIAL

• Agua destilada

• Muestra: suero

• Reactivos

-reactivo 1

-reactivo 2

-calibrador

• Espectrofotómetro a 580 nm

• Cronometro

• Cubetas

• Pipetas

PROCEDIMEINTO

1. Pre incubar los reactivos, muestras y patrón a la temperatura de la reacción.

2. Pipetear en cubetas diferentes lo siguiente

3.- llevar el espectrofotómetro a 0 con el blanco.

4.- mezclar suavemente por inmersión , insertar cubeta en el compartimiento del espectrofotómetro y poner el cronometro en marcha

5.-incubar durante 1minuto y anotar la absorbancia inicial

6.-repetir lecturas exactamente 1 y 3 minutos.

7.- calcular la diferencia entre absorbancias.

8.-calcular el promedio de los resultados del blanco, muestra y patrón para obtener el cambio promedio en absorbancia por minuto ( A/min)

CALCULOS

Restar el ∆A/min del Blanco de los ∆A/min de la Muestra y el Patrón para obtener las respectivas absorbancias corregidas.

Aplicar:

∆A/min muestra X actividad calibrador = U/L lipasa

∆A/min calibrador

VALORES DE REFERENCIA

Adultos sanos ≤ 38 U/L

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