Procedimiento de tinción de Gram

TINCIÓN GRAM

PROCEDIMIENTO

El docente explicará los principios generales de trabajo, para la realización de las técnicas de de tinción, así como su manejo en condiciones asépticas, proporcionara cepas para la tinción, así como muestras problema. Desinfectar el área de trabajo con solución de benzal o alcohol y encender los mecheros.

FROTIS APARTIR DE UN CULTIVO EN MEDIO SÓLIDO

1. Marcar en un extremo los portaobjetos limpios y desengrasados.

2. Colocar con el asa bacteriológica una pequeña gota de agua en el centro del portaobjetos.

3. Tomar con el asa estéril un fragmento de la colonia y hacer una suspensión homogénea en la gota de agua, extendiéndola para formar una película delgada de aproximadamente 1 cm. de diámetro.

4. Dejar secar al aire.

5. Fijar el frotis a la flama, para lo cual se calienta la parte posterior del portaobjetos con la flama del mechero (pasar el portaobjetos por la flama por lo menos 3 veces), a una temperatura que sea soportable en el dorso de la mano.

TINCION DE GRAM

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1. Hacer un frotis de cada una de las cepas.

2. Cubrir los frotis con cristal violeta y dejarlo actuar durante un minuto.

3. Escurrir el colorante y lavar al chorro de agua corriente.

4. Cubrir los frotis con lugol y dejarlo actuar durante un minuto. Escurrir y lavar al chorro de agua corriente.

5. Decolorar con alcohol –acetona (de 5 a 15 segundos), y lavar con agua corriente.

6. Cubrir los frotis con safranina y dejarlo actuar durante un minuto. Escurrir y lavar con agua corriente.

7. Secar al aire.

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