TÉCNICA DE NASBA: AMPLIFICACIÓN BASADA EN LA SECUENCIA DE ÁCIDO NUCLEICO. (NASBA)

MARCADORES MOLECULARES

TÉCNICA DE NASBA: AMPLIFICACIÓN BASADA EN LA SECUENCIA DE ÁCIDO NUCLEICO. (NASBA).

Pérez Rico Lina María.

Universidad de Córdoba, Facultad de Ciencias Básicas, programa de Biología.

Laboratorio de Genética II.

La amplificación basada en la secuencia de ácido nucleico (NASBA) es un sistema de amplificación sensible, isotérmica y basada en la transcripción diseñado específicamente para la detección de objetivos de ARN. En algunos sistemas NASBA, el ADN también puede amplificarse. Este sistema de amplificación utiliza una batería de tres enzimas (transcriptasa inversa del virus de la mieloblastosis aviar, ARNasa H y ARN polimerasa T7) que conducen al producto de amplificación principal del ARN monocatenario.

METODOLOGÍA.

NASBA permite la detección de ARN objetivo por químicos en tiempo real, tales como tintes SYBR o sondas de baliza molecular, una ventaja para minimizar la contaminación considerando el formato de tubo cerrado de este enfoque. NASBA ha sido utilizado en bacteriología diagnóstica para aplicaciones clínicas, ambientales y alimentarias. Los kits NASBA están actualmente disponibles para amplificación y análisis de ARN, un mercado dirigido principalmente al ámbito de la microbiología clínica. Este artículo presentará una descripción general de los antecedentes y la aplicación de NASBA, seguido de protocolos comúnmente utilizados para diagnósticos bacterianos y estudios genómicos en varios experimentos.

La amplificación de ácido nucleico es un valioso molecular herramienta no solo en investigación básica sino también en aplicación campos orientados, como la medicina clínica desarrollo, diagnóstico de enfermedades infecciosas, gen clonación y control de calidad industrial, etc. (Fakruddin, 2011).

Una reacción de amplificación isotérmica de un solo paso en 410°C. 2. Especialmente adecuado para analitos de ARN porque de la integración de RT en la amplificación proceso. 3. El producto de ARN monocatenario es un objetivo ideal para la detección por varios métodos incluyendo solución de hibridación de sonda. 4. Ella fidelidad de NASBA es comparable a la de otros procesos de amplificación utilizando ADN polimerasas que carece de la actividad exonucleasa.

La técnica se ha empleado para la detección. de muchas clases de agentes infecciosos en diferentes tipos de muestras: sangre (Smits et al., 1997), suero(Griffith et al., 1997; Hollingsworth, 1996), plasma (Griffith et al., 1997), plasma seminal (Dyer et al., 1996), semen (Christie et al., 1998), tracto respiratorioespecímenes (Loens et al., 2002), nasofaríngeos biopsias (Brink et al., 1998), muestras del tracto genital (Smits et al., 1995; Mahony et al., 2001), orina

(Morre et al., 1996), biopsias de piel (Smits et al., 1995), saliva (Wacharapluesadee y Hemachuda,2001), líquido cefalorraquídeo (Heim y Schumann,2002, Zhang et al., 2000), heces (Fox et al., 2002),leche materna (Shepard et al., 2000), cervical-vaginal líquido de lavado (Shepard et al., 2000), líquido amniótico (Revello et al., 2003), eflujo de tratamiento de aguas residuales (Jeanet al., 2002), tubérculos de papa (Leone et al., 1997; van Beckhoven et al., 2002), huevos enteros líquidos (Cook et al.al., 2002) y aves de corral (Uyttendaele et al., 1996).

BIBLIOGRAFÍAS.

• Ley Jodi Woan ‐ Fei, Vengadesh Letchumanan, Kok ‐ Gan Chan, Bey ‐ Hing Goh y Learn ‐ Han Lee , Perspectivas sobre la detección e identificación de patógenos transmitidos por los alimentos , patógenos transmitidos por los alimentos y resistencia a los antibióticos , (153-201) , (2017) .Biblioteca en línea de Wiley
• Fakruddin M. Loop mediated Isothermal Amplification (LAMP) - An Alternative to Polymerase Chain Reaction (PCR). Bangladesh Res. Pub. J. 2011: 5(4):425-439.
• Smits H. L., van Gemen B., Schukkink R. et al. Application of the NASBA nucleic acid amplification method for the detection of human papillomavirus type 16 E6-E7 transcripts. J. Virol. Methods 1995: 54: 75–81.
• Griffith B. P., Rigsby M. O., Garner R. B., Gordon M. M. and Chacko T. M. Comparison of the Amplicor HIV-1 monitor test and the nucleic acid sequence-based amplification assay for quantitation of human immunodeficiency virus RNA in plasma, serum and plasma subjected to freeze–thaw cycles. J. Clin. Microbiol. 1997: 35: 3288–3291.
• Dyer J. R., Gilliam B. L., Eron J. J. Jr., Grosso L., Cohen M. S. and Fiscus S. A. Quantitation of human immunodeficiency virus type 1 RNA in cell free seminal plasma: comparison of NASBA™ with Amplicor™ reverse transcription–PCR amplification and correlation with quantitative culture. J. Virol. Methods 1996: 60: 161–170.
• Mahony J. B., Song X., Chong S., Faught M., Salonga T. and Kapala J. Evaluation of the NucliSens Basic Kit for detection of Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae in genital tract specimens using nucleic acid sequence based amplification of 16S rRNA. J. Clin. Microbiol. 2001: 39: 1429–1435.
• Wacharapluesadee S. and Hemachudha T. Nucleic acid sequence based amplification in the rapid diagnosis of rabies. Lancet 2001: 358:892–893.

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