TÉCNICAS EMPLEADAS EN LA SEPARACIÓN DE PROTEÍNAS Y ACIDOS NUCLEICOS

TÉCNICAS EMPLEADAS EN LA SEPARACIÓN DE PROTEÍNAS Y ACIDOS NUCLEICOS

PROTEINAS

Las proteínas desempeñan una amplia variedad de funciones en los mamíferos. Entre las funciones dinámicas se encuentran la catálisis, de las transformaciones químicas, el transporte, el control metabólico y la contracción. En cuanto a sus funciones estructurales las proteínas proporcionan la matriz para los tejidos óseo y conjuntivo que dan estructura y forma al organismo humano.

SEPARACIÓN DE PROTEÍNAS

Las proteínas se purifican mediante procedimientos de fraccionamiento. En una serie de etapas independientes, las diversas propiedades fisicoquímicas de la proteína de interés se usan para separarla de manera progresiva de otras sustancias. Algunos de los procedimientos que se plantean a continuación y las características de la proteína de las cuales dependen son los siguientes:

Característica de la proteína Procedimiento de purificación

Solubilidad Disminución de la solubilidad

Carga iónica Cromatografía de intercambio de iones

Electroforesis

Isoelectroenfoque

Polaridad Cromatografía de interacción hidrófoba

Tamaño Cromatografía por filtración en gel

SDS – PAGE

Ultracentrifugación

Especificidad de unión Cromatografía de afinidad

Separación de proteínas basada en solubilidad

1. Disminución de la solubilidad

La sal elegida, en general sulfato de amonio, se agrega a la solución de macromoléculas en una concentración justo por debajo del punto de precipitación de la proteína de interés (a). Luego de la centrifugación, las proteínas no deseadas que precipitaron se descartan y se agrega más sal al sobrenadante en una concentración suficiente para precipitar la proteína deseada (b). Después de una segunda centrifugación se recupera la proteína como precipitado y se descarta el sobrenadante (c).

Separación de proteínas basada en la carga iónica

1. Cromatografía de intercambio de iones

Se utiliza para la separación preparativa de proteínas basada en su carga. Las resinas de intercambio iónico consisten en materiales insolubles (agarosa, poliacrilamida, celulosa y vidrio) contienen grupos cargados. Las resinas cargadas negativamente fijan fuertemente

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