TÉCNICAS DE INGENIERÍA GENÉTICA Ó TÉCNICAS DEL ADN RECOMBINANTE

La recombinación genética es un proceso biológico que se produce normalmente en todos los organismos, tras el cual se produce un cambio del genoma (patrimonio genético del que está dotado un organismo) y se verifica normalmente con la rotura y la reunión del ADN. Hoy es posible crear moléculas recombinantes entre segmentos de ADN que no presentan homología y que pueden proceder de organismos diversos. Con el uso coordinado de las enzimas de restricción y de los vectores moleculares, es posible aislar una secuencia de ADN de cualquier organismo e inserirla en el ADN de otro. Las formas vivas que han sufrido tal transformación y que contienen un ADN extraño son llamadas transgénicas.

Un hecho que constituyó uno de los avances más espectaculares de los últimos tiempos fue el desarrollo de técnicas que permitieron la manipulación de los genes de diferentes especies en beneficio de distintas actividades relacionadas con la vida humana.

Actualmente, tanto las regiones codificantes como las no codificantes del genoma son aisladas y estudiadas a diario. La utilización de las tecnologías del ADN recombinante permiten saber cómo es la secuencia nucleotídica de una porción de ADN y, de desearlo, generar cambios en dichas secuencias. Se ha facilitado no sólo el estudio más detallado de la función de determinados genes, sino que ha tenido gran repercusión en áreas como la medicina, la agricultura y la industria.

Si tuviéramos que resumir los principales pasos de este conjunto de técnicas diríamos que son los siguientes:

Obtención del ADN del organismo a estudiar (ADN genómico), aislado del resto de las moléculas celulares.

El ADN genómico constituye una macromolécula de característica viscosa y, gracias a esta propiedad, su aislamiento es relativamente sencillo. Cuando se realiza una lisis celular en forma gradual, el contenido celular se dispersa en la solución de incubación y el ADN puede ser "pescado" con una varilla de vidrio o bien precipitado en presencia de alcohol.

2.- Fragmentación del ADN en segmentos discretos.

Una vez que se ha logrado obtener el ADN es posible aislar un determinado gen de toda esa gran macromolécula. Sabemos que en el genoma, la mínima unidad fragmentada es el cromosoma, pero, como cada cromosoma contiene muchos genes, es preciso obtener segmentos aún más pequeños.

En las bacterias existen unas enzimas que son capaces de reconocer secuencias específicas de ADN y separar la unión fosfodiester entre 2 nucleótidos. Así, estas enzimas dan como resultado dos segmentos de ADN. En las bacterias esto es posible sólo si el ADN a ser fragmentado no proviene de la misma cepa, o sea que es un ADN foráneo. Estas enzimas, cuya función biológica es atacar a organismos extraños dentro de las células bacterianas, se denomina enzimas de restricción y son las que se utilizan en forma rutinaria para obtener segmentos de tamaños discretos del ADN que se desea estudiar.

3.- Aislamiento e identificación de un segmento de interés.

Una vez que se ha logrado fragmentar el ADN en segmentos pequeños es necesario que cada uno de estos pueda ser identificado diferencialmente uno del otro. Nuevamente la genética bacteriana aportó la solución. Se trabajó con un tipo de virus bacterianos, los bacteriofagos, y con pequeñas estructuras de ADN circular extracromosomal, llamadas plásmidos. Tanto uno como otro, son capaces de trasmitirse en forma natural de una bacteria a otra y son los responsables de la transferencia de material genético entre las mismas. De hecho, la resistencia a los antibóticos que suele observarse en las bacterias, se encuentra usualmente contenida en los plásmidos, que se replican autónomamente dentro de la bacteria hospedadora.

Sobre la base de estos conocimeintos, se ensayó la posibilidad de que ambos tipos de moléculas pudieran servir como vectores

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