Ultrafiltracion

MATERIA: PROCESOS DE SEPARACION Y PURIFICACION

TEMA: ULTRAFILTRACION

ENSAYO

En el artículo denominado “Improved separation of bovine serum albumin and lactoferrrin mixtures using charged ultrafiltration membranes”, los autores Valiño y San Román et al. (2014), Definieron como objetivo la separación de una mezcla de BSA/LF examinadas por diafiltración usando membranas de 100 KDa compuestas de celulosa y también se realizó un estudio experimental para examinar las influencia de las variables de operación en el flujo de permeación y selectividad durante la separación de mezclas modelo BSA/LF, con la finalidad de obtener un mejor método de separación de BSA/LF.

Para lograr este objetivo los autores se dieron a la tarea de analizar varias propiedades fisicoquímicas de ambas proteínas (suero albumina bovina y lactoferrina) las cuales fueron: potencial z, el tamaño molecular y la tendencia a formar agregados; esto con la finalidad de poder observar su posible efecto sobre el proceso de separación.

En la cuantificación y caracterización de estas proteínas ellos manejaron el HPLC, sin embargo sabemos que esta técnica suele necesitar de estándares, columnas y pre-columnas específicas, los cuales suelen ser muy costosos, por ello, una posible sugerencia es la del manejo de técnicas como la electroforesis con SDS para proteínas; asi para obtener la caracterización de la proteína y también su cuantificación, este tipo de técnica es altamente sensible, además es más sencilla de aplicar y no necesita de reactivos tan caros.

Para medir el tamaño y las propiedades de agregación de las proteínas los autores manejaron el método de dispersión dinámica de luz, en la preparación de membranas y cuantificación del potencial z (el cual hace referencia al punto electrodinámico donde se unen la capa Stern y la capa difusa, este factor suele afectar la característica de dispersión, ya que se si manejan cargas muy elevadas los coloides o proteínas pueden permanecer discretos, dispersos y en suspensión, pero si estas cargas se reducen o eliminan se obtiene el efecto opuesto y los coloides se aglomeran y sedimentan fuera de la suspensión todo ello es mencionado por Zeta-Meter Inc.); utilizaron membranas de celulosa de 100 KDa sin modificar, con carga positiva y carga negativa (utilizando buffer de pH 5 y 9), y para medir el porcentaje de proteína recuperada usaron experimentos de diafiltración donde el parámetro más importante para ellos fue el diavolumen.

Con respectó a los resultados obtenidos de acuerdo a la técnica de dispersión de luz dinámica, ellos se dieron cuenta que al utilizar un buffer de pH 5 lograron mantener el diámetro hidrodinámico de la proteína suero albumina bovina en un rango de hasta 6.64 nm siendo ligeramente más grande que al manejar un pH 9, 5.52 nm y para la lactoferrina se presentaron valores a pH 5 de 8.81 nm y pH 9, 6.99 nm, cabe explicar que el diámetro hidrodinámico se da cuando en un medio liquido se mueve una partícula dispersa, en la cual la mayoría de veces se adhiere a una capa eléctrica dipolar a su superficie y esta capa suele influir en el movimiento de la partícula. Con todo ello se pudo observar que la lactoferrina cuenta con un índice de polidispersidad mayor que la albumina bovina esto se debe a que no presenta una gran homogeneidad en sus pesos moleculares lo que ocasiona la formación de agregados sobre la membrana de ultrafiltración, esta formación de agregados de igual manera puede ser favorecido por cambios de pH, potencial iónico, el tipo de buffer,

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