AISLAMIENTO, RECUENTO DE HONGOS DEL SUELO

FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA DE CIENCIAS QUIMICA

CARRERA DE INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA AMBIENTAL

PERIODO ACADEMICO        : 4 DE ABRIL – 31 DE AGOSTO DE 2016.

NIVEL                                : TERCER SEMESTRE “B”.

FECHA DE REALIZACION        : 16/06/2016.

INTEGRANTES                        : ALEX PROCEL MORENO.                2

                                  ANDERSON GREFA SALAZAR.

                                  LEO NARANJO CALVOPIÑA.

PRACTICA

AISLAMIENTO, RECUENTO DE HONGOS DEL SUELO

1. OBJETIVO DE LA PRACTICA

Capacitar al estudiante en técnicas de aislamiento de hongos de suelo.

1. OJETIVO GENERAL

• Cultivar hongos del suelo para su observacion.

1. OBJETIVOS ESPECIFICOS

• Cultivar hongos del suelo para realizar un recuento.
• Observar hongos del suelo, su forma, color y tamaño.
• Obtener hongos viables para observarlos en el microscopio.

1. MATERIALES

• Cabina de Flujo Laminar
• Autoclave
• Balanza
• Incubadora
• Pipetas de 10ml
• Pipetas de 5 ml
• Pipetas (jeringuillas) de 1ml
• Tubos de ensayo con  tapas
• Cajas petri
• Mechero
• Erlenmeyer de 100
• Probeta de 100ml

SOLUCION SALINA: suspender 0.85 gramos de cloruro de sodio en 100 mL de agua destilada. Se disuelve por agitación, se distribuye en la forma requerida (distribuir 9 mL en 8 tubos de ensayo) tapar y se esteriliza en el autoclave a 121°C durante 15 min.

1. MARCO TEORICO.

El suelo es un hábitat o ecosistema, y no un sustrato; esta característica complica las definiciones y la metodología, porque el suelo representa una mezcla compleja de fracciones orgánicas e inorgánicas con agua y organismos vivos. Las fracciones orgánicas se componen de material de plantas en diferentes fases de descomposición, raíces vivas, exudados, microorganismos, pequeños invertebrados y contenidos intestinales. Por esta razón, el suelo alberga una parte considerable de la biodiversidad total de hongos, y no existe ninguna estima- 246 Manual de biología de suelos tropicales ción fidedigna del número de especies de hongos del suelo (Hawksworth, 1991; Hawksworth y Rossman, 1997).

Los m.o. y los productos del metabolismo celular intervienen en forma muy activa en la formación y estabilización de la estructura del suelo, la cual tiene un efecto directo sobre el desarrollo de las plantas. Una microflora adecuada transforma los residuos animales y vegetales y elabora con ellos nuevos elementos nutritivos para las plantas (Garassini, 1967). Los m.o. interactúan con las raíces de las plantas a nivel de la raíz en si, y dentro de la región directamente influenciada por la raíz. La rizosfera constituye una zona compleja de de interacciones entre las poblaciones microbianas y entre los m. o. Y las plantas. Los m.o. del suelo y de la rizosfera son diferentes.

1. PROCEDIMIENTO

PREPARACION DEL MEDIO DE CULTIVO: PATATA DEXTROSA AGAR (PDA)

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PREPARACION DE DILUCIONES EN BASE 10

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PRECAUCION: 

Para esterilizar usando autoclave las tapas del recipiente así como también de los tubos, deben estar flojas. Caso contrario, el cambio de presión, al tratar de destapar el tubo o recipiente,  puede provocar la apertura violenta del recipiente con el salpicado del líquido hirviente.

Nota: para verificar la temperatura del agar antes de verter en la placa se coloca el recipiente en la mano y si se resiste sin sentir muy caliente, colocarlo en la mejilla de la cara. Cuando este tibio al tacto en la mejilla está listo para ser colocado en la placa. Verter rápidamente ya que al enfriarse por debajo de 45°C se solidifica.

Para realizar las diluciones se debe usar pipetas estériles siempre. Para realizar una dilución nueva, no usar la pipeta usada para realizar la dilución anterior.

NOTA: Se puede usar una sola pipeta (jeringuilla) para sembrar las 3 diluciones, si se empieza sembrando la más diluida y se avanza hacia la más concentrada: 10-5   10-4   10-3  NO al inverso.

SIEMBRA EN SUPERFICIE

Realizar la siembra de las diluciones 10-3 ,  10-4    10-5  en las placas petri (medio PDA).

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RECUENTO

Transcurrido el tiempo de incubación realizar el recuento de los hongos crecidos en las placas.

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1. ANALICIS Y RESULTADOS

Conteo de hongos.

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Reporte:

Reportar el número de hongos por g/suelo.

• se encontró una cantidad de 55 colonias de hongos en la placa con dilución -3, y aplicando la fórmula para determinar el número de hongos, dio como resulta 55000 unidades de hogos.
• Se encontró una cantidad de 27 colonias de hongos en la placa con dilución -4, y aplicando la fórmula de determinación de numero de hongos, dio como resultado 27000 unidades de hongos.

Descripción de diferentes tipos de hongos.

1. CUESTIONARIO.

1. El suelo empleado para el aislamiento constituyo un suelo agrícola. Indique de acuerdo a sus resultados que dilución fue la más idónea para realizar el conteo de los diferentes tipos de hongos.

Según a nuestros resultados la dilución en la que más pudimos realizar el conteo fu la dilución -4 ya que en esta los hongos ya estaban diferenciados unos de otros haciendo posible el recuento de las mismas.

1. Indicar por que se usa el medio PDA para el cultivo de hongos. Indique el tipo de pH del medio y su influencia en el crecimiento de hongos.

Se usa este tipo de medio ya que contiene los nutrientes básicos y necesarios para el crecimiento de hongos y solamente de hongos y el pH del medio es neutral facilitando así el crecimiento óptimo de los hongos.

1. En el medio PDA se adicionó axitromicina (antibiótico) indique por que se realizó la adición de este compuesto.

Se añade el antibiótico (axitromicina) para así evitar el crecimiento de bacterias en la agar, ya que nuestro objetivo es cultivar hongos y no bacterias.

1. BIBLIOGRAFIA

• Garassini, L. Microbiologia Agricola. Universidad Central de Venezuela.1967.

• Girard-Rougieux Técnicas de Microbiología Agrícola. Editorial Acribia. Zaragoza. 1967

• Hawksworth, D. L. y Rossman, A. Y. (1997) ‘Where are all the undescribed fungi?’, Phytopathology, vol. 87, pp. 888–891.

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ESCUELA DE CIENCIAS QUIMICA

CARRERA DE INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA AMBIENTAL

1. PRÁCTICA

• CULTIVO DE MOHOS EN PORTAOBJETO

1. OBJETIVO(S):

1. GENERAL

• Cultivar de mohos de suelo, en portaobjeto.

1. ESPECÍFÍCOS

• Desarrollar conocimientos y destrezas en el método de cultivo en portaobjetos de mohos.
• Visualizar de mejor manera los hongos desarrollados en el portaobjetos.
• Aislar un hongo en el portaobjeto para su mejor estudio.

1. METODOLOGIA

Cultivo de mohos en portaobjeto

1. EQUIPOS Y MATERIALES

• Cabina de Flujo Laminar.
• Autoclave.
• Balanza.
• Incubadora.
• Triángulo de vidrio de 3-4 cm de lado.
• Portaobjetos.
• cubreobjetos.
• Solución de glicerol al 20% estéril.
• rodela de papel filtro de 7-8 cm de diámetro.
• Cajas Petri.
• Mechero.
• caja Petri con agar PDA estéril.
• Asa de inoculación.

1. MARCO TEORICO

La identificación de los hongos filamentosos se basa en el examen macroscópico de la colonia y en sus características microscópicas. Semejanzas macroscópicas como la forma de la colonia, el color de la superficie, la textura y la producción de pigmentos son muy útiles para la identificación. En general, la morfología microscópica de los hongos es estable y presenta pocas variaciones. La identificación definitiva se basa en la forma característica, método de producción y ordenamiento de las esporas, siendo también importante conocer el tamaño y la disposición de las hifas. La preparación del material para la observación microscópica puede realizarse en fresco, con cinta de celofán adhesiva o mediante cultivo sobre portaobjetos.

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