Animales Como Biorreactores

Animales Como Biorreactores

La Expresión de proteínas humanas recombinantes en la leche de los animales lecheros transgénicos ofrece una fuente de proteínas clínicamente importante que no pueden ser producidas eficientemente en cantidades adecuadas por otros métodos. La expresión leche ha sido reportada al menos en 17 proteínas diferentes en cinco especies de ganado, 11 de ellos en niveles comercialmente factibles de >1g/l. (39). Algunas ventajas concomitantes se han encontrado en la purificación de las proteínas de la leche cruda. Las proteínas heterologas han sido expresadas obviamente en especies lecheras: bovinos, ovinos y caprinos. Sin embargo cerdos y conejos también son seleccionados para ciertas aplicaciones por sus grandes camadas en poco tiempo. El tamaño de la producción del rebaño requerido para una aplicación particular dependerá principalmente de la necesidad total anual, el nivel de expresión de proteína recombinante y la eficiencia de la recuperación.

Otro enfoque es el uso de las gallinas, los cuales prometen ser de bajo costo y un reactor biológico de alta rentabilidad. Más de la mitad de las proteínas de la clara del huevo contiene derivados del gen de la ovoalbumina con cuatro otras proteínas (lisozima, ovomucoide, ovomucina y conalbumina) presente en niveles de 50 miligramos o más. (40)

Tomando ventaja de la promoción de este gen para expresar una proteína recombinante podría traer rendimientos de hasta un gramo o más. Puesto que las capas modernas producen 300 huevos por año, tres o cuatro gallinas que producen un gramo por huevo darían un kilogramo de producto crudo anualmente. El huevo naturalmente estéril también permite una proteína recombinante de larga vida de almacenamiento sin pérdida de la actividad. A pesar de estas ventajas, los procedimientos transgénicos para el ave se han quedado muy por detrás de las de otros organismos. La transferencia de genes en el genoma aviar ha sido lograr el uso de los retrovirus, la microinyección de ADN en el citoplasma de cigotos fertilizados, y el uso de transposones de Drosofila.

Sin embargo los niveles de producción han sido solo de 3 a 38 ug de proteína por huevo. Por lo tanto, será necesario el desarrollo de métodos transgénicos más sólidos y eficientes antes de la modificación a voluntad de material genético aviar sea factible.

Detección

Una vez que la proteína se expresa, hay que encontrar la manera de detectarla a lo largo del procedimiento. La inmunodetección es la elección número uno. La proteína es separada en un SDS-PAGE electroforéticamente transfiriéndola a una membrana y luego expuesta a anticuerpos. El primer anticuerpo detecta la proteína de interés, mientras una segunda esta conjugada con otra de fosfatasa alcalina o peróxido que detecta la inmunoglobulina utilizada como primer anticuerpo.

Utilizando los sustratos apropiados para cada enzima, el desarrollo de un color toma lugar cuando ocurre una reacción en la membrana donde las proteínas fueron transferidas y uno es capaz de detectarla. Otra opción para una mayor sensibilidad es el uso de la quimioluminiscencia (CL), una técnica basada en la producción de luz de forma aumentada por CL catalizada por una enzima. Los productos son analizados en CL usando luminol y aumentando como sustrato de peróxido y 1,2- dioxetano conjugado con el fosfatasa alcalina.

La manera más fácil de detectar las proteínas investigadas es a través del uso apropiado de anticuerpos disponibles en el mercado; sin embargo, en muchos casos de proteínas recientemente investigadas, los anticuerpos los anticuerpos que las detectaron no estaba disponible. Se puede producir el anticuerpo, pero requiere del grupo de investigación experiencia y conocimiento en la especialidad. Se consume tiempo y dinero, haciendo uso de etiquetas moleculares seria la mejor opción. Más y más a menudo encontramos que el uso de las etiquetas es extremadamente útil. Siguiendo un código para un polipéptido (en muchos casos no interfiere con la actividad biológica de la proteína cuyo anticuerpo está a disposición en el mercado.

Algunos de estos son: c-myc- a 10 segmentos de amino ácidos del protooncogen

del humano myc (EQKLISEEDL); V5 epitopes derivado de pequeños epitopes (Pk) presenta las proteínas P y V del paramixovirus del virus 5 del simio (GKPIPNPLLGLDST); HA- derivado de la proteína de la hemaglutinina del virus de la influenza humana(YPYDVPDYA); la bandera péptica sintética (DYKDDDKC): sus 6 si 6 histidinas son colocadas en una fila, estas formaran una estructura que una estructura que una los elementos del níquel. Después es especialmente útil por afinidad cromatografía, pero puede también puede ser usada como una etiqueta epitope. La disponibilidad y bajo costos de los anticuerpos y las columnas afines en contra de estas facilidades en su aplicación.

La Purificación

Una vez que hemos expresado la proteína en niveles satisfactorios y es capaz de detectar desde la muestra, se debe desarrollar una estrategia de purificación. Esto es especialmente cierto si el propósito de nuestra investigación es descubrir las características

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