Análisis de colonias transformantes de PCR de colonias y cultivo
Enviado por iristathy • 27 de Julio de 2015 • Ensayos • 430 Palabras (2 Páginas) • 358 Visitas
Universidad de Las Américas
Facultad de Ingenierías y Ciencias Agropecuarias
Ingeniería en Biotecnología
- TEMA DE LA PRÁCTICA: Análisis de colonias transformantes de PCR de colonias y cultivo
- NÚMERO DE LA PRACTICA: 6
- INTRODUCCIÓN
La electroforesis es una técnica utilizada para la cuantificación de ácidos nucleicos y proteínas. Esta metodología permite separar las moléculas antes mencionadas a lo largo de un campo eléctrico a de acuerdo a su tamaño y carga eléctrica. Las biomoléculas migrarán desde el polo negativo al positivo. Todo esto se logrará mediante la adición del buffer TBE 1X. Además se deben preparar las mezclas con buffer de carga, este va contener SYBR el cual se va a intercalar con la muestra.
El cultivo de colonias transformantes en un medio líquido permite la obtención masiva de las células de interés. Este cultivo debe contar con los nutrientes necesarios para el desarrollo de los microorganismos.
- DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
Se prepararon tres muestras con: 2µL de buffer de carga + SYBR y 3 µL del producto de PCR. Las tres muestras eran: control, PCR provenientes de la muestra madre y provenientes de la práctica anterior.
Por otro lado se realizó el cultivo de colonias transformantes en un medio líquido. Se adicionaron 5 mL del medio LB en tubos Corning estériles con 5 µL de ampicilina a 50 mg/L y una pequeña muestra del PCR provenientes de la muestra madre. Estos tubos Corning serán agitadas vigorosamente a 37° por 14-16 horas.
- RESULTADOS
[pic 2]
La corrida de electroforesis mostraron que únicamente el producto de PCR proveniente de la muestra madre fue el correctamente transformado. La muestra obtenida anteriormente no asimilo de forma eficiente el vector recombinante.
El cultivo de células transformantes fue evidenciado en la turbidez que presentaba el medio en cual fueron colocadas previamente.
- DISCUSIÓN
Los resultados obtenidos muestran que al momento de realizar la carga del único producto obtenido existió una mala manipulación, ya que la banda no exhibe la nitidez necesaria.
Existe un crecimiento moderado en el medio de cultivo de las células transformadas, ya que si se las sometía a un mayor período de tiempo existirían conglomerados en el tubo.
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