COLORACION DE PIGMENTOS

Coloración de pigmentos (clorofila-carotenoides).

Materiales:

Cultivo de unialgales

Tubos de eppendorf de 2 ml

Microcentrifuga

Pipetas de Pasteur

Acetona-metanol 2:1

Tubos de spectronic de 2.5 ml

Espectrofotómetro

Lo que se realizó primero fue tomar 1,5 ml de un cultivo unialgal ignorando cuantos días tenía en el tubo Eppendorfdespués se colocó la muestra en una micro centrifuga por diez minuto aproximadamente a 8000 r.p.m.de lo cual resulto un precipitado que es lo que estábamos buscando para así descartar el resto ya que es agar nutritivo, luego se le adiciono 1,5 ml de acetona-metanol y se colocó en el Vortexesperando que el precipitado que teníamos se mezclara con el acetona-metanol, el cual dejamos en un lugar a una temperatura de 4°C donde no penetre la luz del sol para así no afectar los resultados que se desean obtener.

Después de lo anterior, al siguiente día se tomó la muestra y se centrifugo nuevamente ya que de esta nos interesaba el agua y se vertió en los tubos de Spectronic y se le agrego acetona-metanol hasta llevarlo a 2,5 ml y con la ayuda del Espectrofotómetro se calculó la absorbancia (DO) a 480 y a 665nm y un blanco de 2,5 de acetona-metanol 2:1 al 95%

Resultados:

Obtenido por el Espectrofotómetro

A 665nm = 0,137

A 480nm = 0,089

clorofila a (ug/ml)=[((DO665×13.14))/VM]×VE

clorofila a (ug/ml)=[((0.137×13.14))/1ml]×2.5 ml=4,50045

carotenoides totales (ug/ml)=[((DO480×4))/VM]×VE

carotenoides totales (ug/ml)=[((0.089×4))/1ml]×2.5 ml=0,89

...