Coloraciones

COLORACION1

Los tejidos son incoloros y solamente se observan el núcleo y los límites de la célula. Por eso se introdujeron los métodos de Coloracion, para tratar de hacer visibles los componentes del tejido y diferenciarlos entre sí.

Los colorantes tienen diferentes afinidades por las células y sus componentes. La tinción permite ver las características físicas de los tejidos y las relaciones entre las células que lo constituyen.

CLASIFICACION DE LOS COLORANTES

1. SEGÚN SU ORIGEN

1. Naturales
2. Artificiales

1. SEGÚN SUS PROPIEDADES

1. Ácidos
2. Básicos
3. Neutros

COLORANTES NATURALES

1. NUCLEARES: hematoxilina

                        Carmín

1. CITOPLASMATICOS: orceina

                                     Azafrán

                                     Safranina

COLORANTES SINTETICOS: son sustancias cromáticas artificiales preparadas a partir del alquitrán de hulla, derivadas de la anilina. Ejemplos: eosina, cristal violeta, azul de toluidina.

COLORANTES BASICOS: la sustancia activa, es una base. Colorea estructuras acidas, como los núcleos, y tienen carga eléctrica positiva. Ejemplo: hematoxilina.

COLORANTES ACIDOS: la sustancia activa, es una acido. Colorean los citoplasmas, y tienen carga eléctrica negativa. Ejemplo: eosina.

COLORANTES NEUTROS: son mezclas de ácidos y  básicos. Ejemplo: Giemsa.

HISTORIA: 1714 Antón Van Leeuwenhoek, descubre que el azafrán colorea el musculo estriado.

1863: Waldeyer descubre la hematoxilina.

1856: se descubren las anilinas artificiales, con lo que se desarrolla mucho la histotecnologia.

SUSTANCIAS QUE INFLUYEN EN LA COLORACION

1. MORDIENTES: facilitan la fijación del colorante sobre los tejidos. Ejemplos: sales de aluminio, hierro, cromo, sulfatos y cloruros.

Alumbres: de potasio, aluminio, hierro y amonio.

1. ACENTUADORES: aumentan la intensidad del color, la selectividad del colorante, y la diferenciación de los elementos.

A diferencia de los mordientes, no fija ni une le colorante al tejido. Ejemplos: la anilina para la violeta de genciana, el hidróxido de potasio, para el azul de metileno.

1. ACELERADORES: se usan en la impregnación metálica de fibras nerviosas. Aceleran la coloración. Ejemplos: veronal, hidrato de cloral.

1. DIFERENCIADORES: disuelven el exceso de colorante; no debe excederse el tiempo de diferenciación, porque puede decolorar definitivamente el tejido. Ejemplos: el alcohol acido.

1. AZULEADORES: se utilizan para neutralizar la acidez de una coloración, por medio de una solución alcalina. Ejemplos: amoniaco, bicarbonato de sodio, carbonato de litio.

METODOS DE COLORACION

DIRECTA: hay afinidad entre el tejido y el colorante. No requiere de mordientes.

INDIRECTA: requiere de sustancias adicionales como los mordientes, para fijar el colorante al tejido.

PROGRESIVA: hace actuar el colorante, hasta que alcance el punto óptimo de coloración (intensidad) deseada y se suspende con el lavado.

REGRESIVA: primero hay una coloración intensa y luego con la ayuda de los diferenciadores, se elimina el exceso de colorante hasta lograr la intensidad deseada. En este método de coloración, es muy importante la experiencia.

HEMATOXILINA

Es un colorante natural, extraído del árbol Hematoxylin campechanium, palo de Campeche, o palo azul de Centroamérica; inicialmente fue utilizada para teñir seda y lona, y en 1862 se utilizó para la coloración de tejidos animales.

Comercialmente se consigue en forma de cristales rosados o amarillentos solubles en agua o alcohol.

Para ser empleada en histotecnologia, debe oxidarse a hemateina, mediante el contacto con el oxígeno (maduración de la hematoxilina).

Esta maduración puede hacerse artificialmente usando oxido de mercurio, yodato de sodio, permanganato de potasio o dicromato de potasio.

Es color final característico es rojo vinoso. Debe almacenarse en frasco oscuro y filtrarse antes de usar.

800 ml de hematoxilina, alcanzan para 200 placas.

HEMATOXILINA DE HARRIS

REACTIVOS:

Cristales de hematoxilina                                5 gr

Alcohol etílico puro                                          50 ml

Alumbre de amonio o potasio                       100 gr

Agua destilada                                                  1000 ml

Oxido rojo de mercurio                                   2, 5 gr

PREPARACION: se requiere de una olla que no contenga nada de aluminio (peltre).

Disolver los cristales de hematoxilina en el alcohol al calor, hasta que tome color caramelo.

El alumbre se disuelve en el agua caliente.

Juntar las dos soluciones así: la hematoxilina sobre el agua con el alumbre, dejando hervir y revolviendo.

Agregar el óxido de mercurio rojo lentamente y revolviendo hasta que forme una capa metálica en la superficie (20 a 30 minutos).

Bajarla del calor y dejar enfriar tapada.

Filtrar y luego agregar ácido acético glacial en una proporción de 2 ml por cada 100 ml de hematoxilina filtrada.

Filtrar antes de usar y guardar en frasco oscuro. Duración de 6 a 12 meses.

ALCOHOL ACIDO: alcohol al 70%                                  100 ml

                                Ácido clorhídrico concentrado      1 ml

AGUA ALCALINA: bicarbonato de sodio, carbonato de litio o hidróxido de amonio       al 1%

EOSINA AMARILLENTA:

1. SOLUCION MADRE 1%:

Eosina yellow soluble en agua                        1 gr

Agua destilada                                                   20 ml

Disolver y agregar alcohol isopropilico         80 ml

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