Cromatografia

UNIVERSIDAD PONTIFICIA BOLIVARIANA

PRACTICA DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA

PROFESORA:SANDRA NATALIA CORREA T.

PRACTICA 2: PIGMENTOS FOTOSINTESITCOS Y EXTRACCION DE PIGMENTOS Y SEPARACION CROMATOGRAFICA

INTRODUCCION.

Uno de los procesos metabólicos más importantes de las células vegetales lo constituye la fotosintesis. Durante la fase luminosa de la misma es imprescindible la participación de diferentes pigmentos fotosintéticos que se encuentran dentro de los plastidios, y que le confieren la coloración característica de las hojas de las plantas. Los pigmentos de mayor importancia son las clorofilas: la clorofila A que tiene un color verde azulado, y la clorofila B de color verde amarillento. También son importantes los carotenoides, de color anaranjado-rojizo, y las xantofilas de color amarillo.

El surgimiento de los métodos cromatográficos está marcado precisamente por el estudio realizado por el científico ruso M.S.Tswett, quien en 1903 publicó un trabajo sobre la separación de pigmentos vegetales a través de una columna llena de un compuesto adsorbente (yeso,alumina, almidón u otro) al aplicar un extracto de plantas preparado con solventes orgánicos (etanol, acetona, benceno, etc.). La separación de estos pigmentos se puede realizar también mediante cromatografia en capa fina o en papel, utilizando diferentes sistemas de solventes. Cromatografia es la tecnica de separacion de los compuestos de una mezcla, por medio de dos fases liquida y solida o gas. Donde el solido actua como la fase estacionaria y el liquido (gas) actuan como la fase liquida. La fase solida retiene los analitos ( sustancias en estudio) de interes., la fase liquida arrastra el solvente. Existen varios tipos de cromatografia: cromatografia de papel, cromatografia de columna, cromatografia de gases, cromatografia liquida entre otras.

El estudiante debe leer sobre cromatografia y los diferentes tipos de crotmagrafia. Buscar la ecuacion de factor de respuesta para la separacion de los analitos de interes.

OBJETIVOS:

1. Utilizar técnicas cromatografícas para la separación de pigmentos encontrados en material vegetal.

2. Calcular el factor de Respuesta para los pigmentos separados.

3. Establecer diferencias entre las dos técnicas cromatograficas.

PARTE EXPERIMENTAL

MATERIALES Y REACTIVOS.

1 Mortero con pistilo 1 Rejilla de soporte de tubos de ensayo

1 Papel de Filtro Algodón (Pequeñas cantidades)

1 Embudos de Plástico (o de vidrio) 1 Pinza con nuez

1 Beaker de 10mL y 100mL 1 Tijera

1 Laminas de Cromatografía de Capa Fina 1 Cuchillo o bisturí

1 Vidrio Reloj (grande) 1 Gasa (pedazo 20cm*20cm)

1 Reglas de medir (mm o cm) 4 Tubos de ensayo

1 Espátula 1 Balanza

1 Tubo capilar Acetona (10%) , Etanol (30 % ), Alúmina (AlO3) o almidón, Arena,

PROCEDIMIENTO:

I. Extracción de pigmentos vegetales por medio cromatografica de capa fina

1. Pese 2 gramos de hojas frescas (de un mismo color) desmenuzadas y tritúrelas en el mortero, añadiendo una pequeña cantidad de arena.

2. Añada poco a poco 5 ml del solvente orgánico seleccionado para la extracción (acetona 10% : etanol 30% en proporción 4:1) para realizar

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