Cuantificacion De Una Proteina

Introducción

Todas las estructuras celulares están formadas por proteínas y prácticamente todas las funciones celulares son realizadas por las proteínas (enzimas, trasportadores, anticuerpos, los receptores, citoesqueleto, etc.).

Apartes de sus funciones específicas, las proteínas participan en la regulación del equilibrio osmótico, y tienen capacidad reguladora del PH.

El método a ocupar para reconocer y cuantificar las proteínas, es la calorimetría, que consiste en absorber selectivamente ciertas longitudes de onda de la luz incidente de manera directamente proporcional al espesor del medio y de la concentración de la sustancia.

En la práctica para determinar espectrofotométricamente la concentración de una sustancia se requiere una serie de concentración estándar y una muestra blanco que contiene todos los componentes del ensayo con excepción de la sustancia a medir y la muestra con la sustancia problema.

El complejo (proteína + reactivo de Biuret) muestra absorción máxima a 330 y 545 nm de absorción, generalmente se mide a 546nm para propósitos cuantitativos de absorción es mayor a 330nm, pero en esa longitud es probable que haya interferencia [1].

Cuando una solución de proteínas se alcaliniza fuertemente con hidroxilo de sodio o de potasio y se agrega una solución diluida de sulfato de cobre, se produce un color violeta, cuya intensidad depende de la concentración de proteína utilizada.

Esta reacción llamada reacción de Biuret, es propia de las sustancias que contienen dos grupos carbamilos (-CONH) unidos directamente o por medio de un átomo de carbono o de nitrógeno. Las proteínas y los péptidos (a partir de los tripéptidos) presentan dicha estructura y por lo tanto, dan positiva esta reacción.

El objetivo de este experimento una vez desarrollada esta actividad práctica se conocerá la absorbancia de las proteínas según la sustancia colocada en él y leída en el espectrofotómetro.

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