Demostración del Efecto Pasteur

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Demostración del Efecto Pasteur

Objetivos

• Comparar la velocidad de consumo de glucosa a lo largo del proceso de fermentación.
• Comprobar el efecto Pasteur mediante consumo de glucosa en condiciones aerobias y anaerobias.

Introducción

La fermentación puede clasificarse atendiendo a las condiciones en que se dé la fermentación en: aerobia (presencia de oxígeno) y anaerobia (ausencia de oxígeno). El proceso de fermentación por levaduras puede variar de acuerdo a las condiciones en que se realizan: La fermentación aerobia consume con regularidad glucosa, con la cual produce dióxido de carbono y ATP como energía. Este proceso consume lentamente el sustrato (glucosa) y se puede dar un pequeño cambio en la cantidad de ATP. Al comparar esta condición con la anaerobia, se tiene que en ausencia de oxígeno, fermentación consume mucho más sustrato que en la aerobia, con la producción de dióxido de carbono y etanol, además, la concentración de ATP en el medio varía muy poco. Este efecto se denomina efecto Pasteur en honor a su descubridor, Louis Pasteur.

Se realizará la demostración de este efecto empleando microescala, y determinando en forma cualitativa y cuantitativa la concentración de glucosa. Para efectos cualitativos se empleará la prueba de Benedict y para la determinación cuantitativa se empleará el método espectrofotométrico de glucosa oxidasa.

Materiales y reactivos

Levadura, soluciones al 8% de glucosa, baño termostático, probetas de 25 y 10 mL, tubos de ensayo adaptados para escape del dióxido de carbono, plancha, vasos químicos de 100 mL, papel parafilm, gradilla tubos de centrífuga, espectrofotómetro, Benedict,

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Procedimiento

1. Fermentación

Colocar en 8 tubos de ensayo 1,5 mL de levadura, 1,5 mL de agua y  2,5 mL de glucosa destilada. Accionar el cronómetro. Colocar los tubos a 37 °C, tapar 4 de ellos (anaerobios) y dejar destapados los otro 4 (aerobios).

Realizar las pruebas a 10, 20, 30 y 45 minutos como se describe a continuación.

1. Determinación de glucosa

Mida 1 mL de la solución de los tubos de ensayo y diluya con 4 mL de agua. Homogenice y coloque en un tubo a reaccionar dos gotas de la dilución con 1 mL de Benedict y colocar en ebullición por tres minutos exactamente.

Evalúe la concentración de glucosa empleando un código de cruces según la intensidad del precipitado formado.

Cuestionario

1. Investigue el principio de la determinación cualitativa y cuantitativa empleada
2. ¿Qué ventajas y desventajas presenta cada método de determinación de glucosa empleado?
3. ¿Qué otra metodología emplearía usted para evaluar el efecto Pasteur?

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