EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS
Enviado por Itzel Zetina • 1 de Marzo de 2022 • Ensayos • 678 Palabras (3 Páginas) • 226 Visitas
UNIVERSIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA DE MEXICO
INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA
BIOLOGÍA MOLECULAR II
Grupo: BI-BBM2-2201-B1-001
Unidad I: Biología molecular de ácidos nucleicos
Actividad 2. “Extracción de ácidos nucleicos”
Nombre del docente: M.B. Yajaira Sulim Vigueras Morales
Nombre del alumno: Ursula Garduño
Número de matrícula: al12526700
Fecha: 6 de febrero de 2022
EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS
Introducción
La extracción y purificación de ácidos nucleicos es muy importante para poder realizar estudios posteriores como, por ejemplo, marcadores moleculares, técnicas de PCR, estudios de ADN, identificación de cuerpos y estudio de pruebas forenses, entre otros
Objetivo
El objetivo de la práctica es aprender a extraer, purificar y precipitar ADN a partir de la toma de una muestra del interior de la cavidad bucal, aprenderemos a utilizar los diferentes instrumentos y soluciones que se emplean para obtener ADN de una excelente calidad-
Desarrollo
Con un hisopo de algodón tomamos una muestra mucosa yugal o malar, que se encuentra en el revestimiento interno de las mejillas, se corta el hisopo y se coloca la muestra dentro de un tubo Eppendort
[pic 1]
Para poder romper las células del tejido, es importante saber elegir la solución buffer de lisis, púes debe de ser lo suficientemente fuerte para poder romper dichas células, pero al mismo tiempo muy gentil para preservar el ácido nucleico a analizar.
Dentro del tubo que contiene la muestra de ADN, con ayuda de una micropipeta, se coloca el buffer que puede ser, por ejemplo, una solución salina de NaCl y se completa con un volumen de 40 ml de agua destilada.
[pic 2]
Se coloca el tubo en un baño de agua tibia para poder abrir las células y así obtener el ADN
[pic 3]
El buffer de lisis, recordemos, que contiene dos ingredientes muy importantes: detergente y la enzima proteinasa K, el detergente rompe tanto la membrana celular y la envoltura nuclear, haciendo que las células se abran y liberen su ADN, la proteinasa K, corta los histones y libera el ADN.
[pic 4]
Se ha retirado la parte del hisopo que contenía la muestra de ADN y se agrega una solución salina concentrada, esta solución separa las proteínas y otros desechos celulares del ADN
[pic 5]
Se centrifuga el contenido del tubo, al terminar, se observa que las proteínas y otros desechos celulares se van al fondeo del tubo, mientras que en la solución acuosa permanece el ADN y con ayuda de una micropipeta, agregamos alcohol isopropílico para precipitar el ADN, que una vez seco, podemos almacenarlo en el refrigerador.
[pic 6]
Etapas de extracción de ácidos nucleicos | ADN | ARN |
Mayor capacidad de resistir al proceso, es degradado por DNAsas | Se degrada fácilmente con RNAsas | |
Extracción |
| Inactivación de RNAsas, usando: tiocionato de guanidina, las que lisan las células. Trizol: mantiene la integridad del RNA durante la lisis |
Purificación | Se mezcla, generalmente, éter, buffer TE pH 8.0 y H2O 1:1 | Por cromatografía |
Precipitación | Se agrega etanol al 70% | Usando isopropanol |
Usos | ||
ADN | ARN | |
Para estudios de:
| Para estudios de:
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Conclusiones
El obtener un ácido nucleico de una excelente calidad, depende de saber usar los diferentes instrumentos que se necesitan para llevar a cabo el protocolo correspondiente de extracción, purificación y precipitación, las diferentes soluciones empleadas también deben de ser en la medida y concentración requeridas,
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