Enzimoinmunoanalisis De Adsorcion

ENZIMOINMUNOANÁLISIS DE ABSORCIÓN (ELISA).

Luna, Jorge1; Ríos, Linda1.

1 Estudiantes 7 ° semestre de biología.

UNISUCRE.

RESÚMEN.

La exquisita especificidad de los anticuerpos por un antigeno concreto los convierte en un valioso reactivo para proceder a su detección, purfificación y cuantificación. Como prácticamente puede producirse anticuerpos contra cualquier tipo de macromolécula y sustancia química de pequeño tamaño, el empleo en las técnicas basadas en los anticuerpos sirve para estudiar prácticamente cualquier tipo de molécula contenida en una solución o una célula. La prueba de ELISA se basa en el uso de antígenos o anticuerpos marcados con una enzima, de forma que los conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunológica como enzimática. Al estar uno de los componentes (antígeno o anticuerpo) marcado con una enzima e insolubilizado sobre un soporte (inmunoadsorbente) la reacción antígeno-anticuerpo quedará inmovilizada y, por tanto, será fácilmente revelada mediante la adición de un substrato especifico que al actuar la enzima producirá un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un espectrofotómetro o un colorímetro. El objetivo principal de la práctica fue detectar anticuerpos Ig G en diferentes tipos de suero problema mediante la técnica de ELISA directo. Para lo cual.................

Palabras clave: ELISA, anticuerpos, suero problema, absorbancia, diluciones.

INTRODUCCIÓN.

La técnica de Elisa es un procedimiento de ensayo inmuno enzimático cuyo nombre resulta de la asociación de las iníciales de su denominación inglesa Enzyme-Linked InmunoSorbent Assay. Como todo ensayo inmuno enzimático, esta prueba recurre al empleo de inmunógenos, haptenos ó anticuerpos marcados con una enzima, para revelar el reactivo complementario a nivel de distintos fluidos biológicos. Fue concebida independientemente en 1971 en Suecia y Holanda, siendo aplicada posteriormente a la revelación y a la cuantificación de los más diversos tipos de sustancias presentes en líquidos orgánicos (antígenos, anticuerpos, hormonas, fármacos, etc.) 1.

El área de sus aplicaciones médicas se ha expandido en forma sostenida, siendo utilizada como el primer sustituto de la técnica de Radioinmunoensayo en la medición de hormonas, inmunoglobulinas, antígenos y anticuerpos en infecciones bacterianas, micósicas, parasitarias o víricas. De un modo general se procede a la fijación de uno de los componentes de la reacción inmunológica (antígeno Ag o anticuerpo Ac) a un soporte sólido, poniendo luego ese sistema en contacto con una fase fluida que contiene el reactivo complementario. El complejo inmunológico formado es enfrentado luego a las moléculas capaces de reconocer a su componente más superficial, marcadas con una enzima, agregándose posteriormente un sustrato cromogénico de la enzima marcadora. La existencia de una reacción inmunológica se demuestra y se cuantifica midiendo espectrofotométricamente la cantidad de producto enzimático resultante1.

La técnica de ELISA tiene tres tipos:

ELISA DIRECTO:

Consta de las siguientes etapas:

• Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de antígenos específicos. Lavado para eliminar los antígenos fijados deficientemente o no fijados.

• Adición de anticuerpos marcados (“conjugados”) con una enzima; si los anticuerpos reaccionan con los antígenos, el complejo quedará solubilizado. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.

• Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede parar la reacción si se desea.

• Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.

ELISA INDIRECTO:

Consta de las siguientes etapas:

•

...