Espectroscopia UV

Práctica N. 1: Espectrofotometría ultravioleta – Robustez del espectrofotómetro

Prelaboratorio

1. Regiones del espectro electromagnético y sus longitudes de onda

                                                             Tabla 1 - Espectro y longitudes        [1]

1. Fundamento del funcionamiento de la técnica de análisis instrumental

Para la espectrometría UV-Vis se emplea específicamente la espectrometría de absorción, la cual es la interacción de la radiación electromagnética con la materia. Para esto se compara la intensidad de un haz de luz medida antes y después de la interacción con una muestra, la radiación que se usa en el haz de luz que incide en la muestra en este caso en el rango visible y ultravioleta del espectro electromagnético. Esta luz de una longitud de onda particular que absorbe la muestra se puede correlacionar con la presencia y estructura de una sustancia en particular. Mediante esta técnica de espectrometría de absorbancia se pueden hacer cálculos cualitativos, cuantitativos y estructurales.  [2]

1. Utilidad de la espectrofotometría en Qca. Analítica

Con esta técnica se puede conocer la composición química de una muestra dada, a su vez las concentraciones relativas de varios compuestos de una mezcla. De igual manera y de forma más específica se pueden realizar valoraciones fotométricas, determinación de constantes de disociación de ácidos o bases débiles determinación de la estequiometría y constantes de estabilidad de complejos en métodos cinéticos de análisis, entre otros. [3]

1. Concentración de un analito por espectrofotometría UV-Vis y

La absorbancia de un soluto depende linealmente de la concentración, esta concentración es tomada de la absorbancia de la muestra y una curva de calibración la cual se obtiene generalmente de la absorción medida de un estándar externo. De igual manera esta concentración del analito en una muestra puede ser calculada directamente por la medición de absorbancia de la muestra y valores conocidos de b y ε sin necesidad de acudir a un estándar externo (Esto se ampliará en la explicación de la ley de Lambert-Beer) [4]

1. Ley de Lambert-Beer

Esta ley nos relaciona la absorbancia con la concentración de la sustancia en la que:

       [pic 1], donde:

• c: concentración expresada en mol/L
• b: es la anchura de la célula que contiene la disolución de la sustancia expresada en cm
• ε: es la absortividad molar la cual es una propiedad característica de cada sustancia correspondiente a la cantidad de radiación que absorbe a una longitud de onda determinada por unidad de concentración, siendo sus unidades L mol-1 cm-1 ya que esta no tiene unidades

Para poder aplicar la ley de Lambert-Beer es necesario seleccionar previamente una longitud de onda ya que tanto A como ε varían con ella. Para ello se obtiene previamente el espectro de absorción de la sustancia, que consiste en una representación de los valores de absorbancia frente a la longitud de onda expresada en nanómetros (nm).  [5]

1. Longitud de onda teórica de los reactivos

                Tabla 2 - Longitudes de onda de reactivos                                                                                                               [6,7,8,9]

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