Grampositivas y gramnegativas

Microbiología. 2015-08-16

MANEJO DEL MATERIAL, MICROSCOPIO Y COLORACIONES

KAREN SAMPER (06121016), XIMENA (), ANDRES RINCON (),

Corporación tecnológica de Bogotá. Regencia de farmacia. 6 semestre.

 INTRODUCCION

En microbiología el microscopio se utiliza de forma rutinaria, ya que proporciona importante información  para la identificación de los microorganismos; tiene una serie de lentes y utiliza luz visible como fuente de iluminación, el conjunto de lentes forma una imagen focal definida cuyo tamaño es mucho mayor que el de la muestra en sí; este aumento se logra cuando los rayos de la luz procedentes de la fuente de luz pasan a través del condensador , que tiene lentes que dirigen los rayos de luz a través de la muestra . De aquí los rayos pasan al interior de la lente objetivo la lente más próxima a la muestra, la imagen de la muestra vuelve a ser ampliada por el ocular. La mayoría de microscopios utilizados en microbiología poseen varios lentes objetivo, que proporcionan 10 x (bajo aumento), 40 x (gran aumento) y 10 x (de inmersión en aceite). El máximo poder de resolución emitida es de 0.2 µm, por lo que se requiere de una amplificación entre 1000-1400x, mientras que el poder de resolución del ojo humano es de aproximadamente 0.2mm, (Tortora, 2007). Para aprovechar esta ventaja de los, microscopios se han desarrollado técnicas de tinción que destacan las características de los microorganismos (Keller, 2013).

Antes de realizar un análisis en microbiología se debe esterilizar los materiales a utilizar para el control microbiano, deben considerarse sus efectos sobre otros elementos además de los microbios, por ejemplo ciertas vitaminas o algunos antibióticos en solución podrían ser inactivados por el calor.  Existen varias técnicas utilizadas para el control microbiano que son el calor húmedo, pasteurización, incineración, calor seco y radiación iónica entre otros , el que se utilizó en la práctica de laboratorio fue el de calor húmedo ya que este consiste en  la ebullición que causa la muerte de la formas vegetativas de las bacterias patógenas de casi todos los virus y de los hongos y sus esporas en unos 10 minutos, la esterilización confiable con calor húmedo requiere temperaturas superiores a las  de la ebullición del agua, estas temperaturas elevadas se alcanzan mediante vapor bajo presión en una autoclave; la colocación en autoclave es el método preferido de esterilización a menos que el material que se desea esterilizar pueda ser dañado por el calor o la humedad. La autoclave se utiliza para la esterilización de  medios de cultivo, instrumentos, ropa, jeringas y muchos otros artículos que puedan soportar  temperaturas y presiones altas. (Tortora, 2007).

 Las tinciones se pueden clasificar como simples cuando toda la muestra se tiñe del mismo color y se utiliza un sólo colorante (azul de lactofenol o tinta china); tinción diferencial, cuando se visualiza más de un color porque se utiliza más de un colorante (Gram o Ziehl-Neelsen); tinción específica, cuando se utilizan anticuerpos marcados con una molécula fluorescente para identificar una estructura celular en particular.

Como casi todos los microorganismos son casi incoloros cuando se les observa a través de un microscopio óptico estándar, a menudo es preciso prepararlos para la observación y una de las maneras de hacerlo consiste en someterlos a tinción (coloración), esta tinción destaca ciertas estructuras del microorganismo a observar, por ejemplo la tinción de gram fue desarrollada por el bacteriólogo danés Hans Christian Gram en 1884 y es uno de los procedimientos de tinción más útiles para calificar las bacterias en dos grandes grupos: gampositivas y gramnegativos (Tortora, 2007), la técnica  consta en cuatro pasos: en primer lugar, la extensión, previamente fijada, se tiñe con un colorante básico (violeta de genciana o cristal violeta), a continuación se trata con lugol u otro mordiente, con el fin de aumentar la afinidad de la célula y el colorante. Posteriormente, se decolora con alcohol-acetona y por último se tiñen con safranina o fucsina que actúan como colorante de contraste; las bacterias grampositivas logran retener el colorante inicial a pesar de la decoloración y aparecen de color violeta oscuro, la gramnegativos se decoloran y son rojas por el colorante de contraste.  (Rodriguez Garcia & J.J.Picazo, 2000).

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