Laboratorio Adn An Diversas Plantas

Laboratorio # 8

Introducción:

El ácido desoxirribonucleico, frecuentemente abreviado como ADN, es un ácido nucleico que contiene instrucciones genéticas usadas en el desarrollo y funcionamiento de todos los organismos vivos conocidos y algunos virus, y es responsable de su transmisión hereditaria. El papel principal de la molécula de ADN es el almacenamiento a largo plazo de información. Muchas veces, el ADN es comparado con un plano o una receta, o un código, ya que contiene las instrucciones necesarias para construir otros componentes de las células, como las proteínas y las moléculas de ARN. Los segmentos de ADN que llevan esta información genética son llamados genes, pero las otras secuencias de ADN tienen propósitos estructurales o toman parte en la regulación del uso de esta información genética.

Objetivo: Poder notar la presencia del ADN en diversos tipos de plantas y poder verlos.

Materiales y reactivos:

Muestra vegetal

Agua destilada

Sal

Bicarbonato de sodio

Detergente líquido o shampoo

Alcohol

Licuadora

Colador

Vaso / beaker

Tubos de ensayo

Varilla fina

Fundamento:

La extracción de ADN de muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula. Se empieza por licuar (romper) las células mediante un detergente, vaciándose su contenido molecular en una disolución tampón en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampón contiene ADN y todo un surtido de restos molecular: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor proporción. Las proteínas asociadas del ADN, de gran longitud, se habrán fraccionados en cadenas más pequeñas y separado de el por acción del detergente. Solo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampón y detergente, para lo cual se utiliza alcohol isoamílico.

Metodología:

1. Preparar el tapón con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en baño de hielo triturado:

120ml de H2O destilada

1.5g de cloruro de sodio

5g de bicarbonato de sodio

5ml de detergente líquido o shampoo

2. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN y cortarla en cuadritos

3. Triturar la muestra con un poco de agua en la licuadora accionando las cuchillas a impulsos de 10 segundos. Así se romperán las células y otras quedaron expuestas a la acción del detergente.

4. Mezclar con un recipiente limpio 5ml del triturado celular con 10 ml del tampón frio y agitar vigorosamente durante al menos 2'. Separen luego los restos vegetales más grandes del caldo molecular haciéndolo pasar por un colador lo más fino posible. (Lo ideal es centrifugar a baja velocidad 5' y después pipetear el sobrante).

5. Retirar 5ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y añadir con pipeta 10ml de alcohol frio. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo este inclinado. El alcohol quedara flotando sobre el tampón.

6. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separación entre el alcohol y el tampón. Remover la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a poco se irán enrollando lis fragmentos de mayor tamaño fe ADN. Pasando 1 minuto retirar la varilla atravesando la copa de alcohol con lo cual el ADN quedara adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodón mojado. El producto filamentoso u obtenido de la extracción no es ADN puro ya que, entremezclado con él, hay fragmentos de ADN para impedir que las mezclas de ARN se unan al ADN SE añade enzimas que fragmentan las moléculas de ARN.

Resultados:

Luego de haber elaborado el tampón procedimos

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