PROCEDIMIENTO. COLORACION DE GRAM

PROCEDIMIENTO:

• Preparaciones no coloreadas (en fresco) :

1. Tomamos un hisopo estéril y lo frotamos suavemente por cualquier parte del cuerpo ( boca, oído, faringe etc.) o mucosa de la nariz
2. Introducimos el hisopo dentro de un tubo con solución salina, mezclamos y dejamos en reposo por unos segundos.
3. Colocamos una gota de la  mezcla con el asa en el portaobjetos y le pusimos un cubreobjetos sobre la gota.
4. Observamos en 10x y 40x.

• Preparaciones coloreadas: coloración simple

1. Tomamos un hisopo estéril y lo frotamos sobre cualquier parte del cuerpo o lo introducimos en la mucosa de la nariz.
2. Hacemos un extensión sobre la lámina en forma de espiral de adentro hacia afuera y la dejamos secar.
3. La pasamos por la llama del mechero 3 veces para fijar la muestra.
4. Colocamos los portaobjetos en el puente de tinción y cubrimos las muestras con azul de metileno y otras con verde malaquita, lo dejamos actuar por 1 minuto.
5. Lavamos con agua destilada para eliminar el exceso de colorante y lo dejamos secar al aire libre.
6. Vemos las muestras con el objetivo de inmersión (100x).

COLORACION DE GRAM:

• muestra corporal :

1. Cogemos un hisopo estéril y lo frotamos por la superficie de nuestro cuerpo (nariz, oído ,boca etc.)

1. Hacemos el extendido en el portaobjetos en forma de espiral de adentro hacia afuera y lo dejamos secar a temperatura ambiente.

[pic 1]

1. Lo fijamos pasando el portaobjetos 3 veces por el mechero.
2. Colocamos los portaobjetos en el puente de tinción, lo cubrimos con cristal violeta por 1 minuto y lo lavamos con agua destilada.

[pic 2]

1. Cubrimos el portaobjetos con lugol de gram por 1 minuto. Lavamos con agua destilada.

1. Sostenemos el portaobjetos entre el pulgar y el índice y echamos gotas  en la superficie del decolorante alcohol acetona. Esto requiere de 10 a 30 segundos.

[pic 3]

1. Lavamos con agua destilada y colocamos nuevamente el portaobjetos en el puente de  tinción y lo cubrimos con safranina que es el contra color durante 1 minuto. Lavamos con agua destilada.

[pic 4]

1. Colocamos el portaobjetos en forma vertical dejando que se escurra y que se seque.

[pic 5]

1. Observamos con el objetivo de inmersión (100x)

• Cultivo de bacterias :

1. Pusimos en un portaobjetos una gota de agua destilada y en una caja de Petri ( e. coli y e. aureus )  con un asa previamente esterilizada cogemos una pequeña cantidad de cultivo bacteriano.

[pic 6]          [pic 7]

1. preparamos un extendido en del cultivo en el portaobjetos.        

    [pic 8]

1. fijamos el material pasándolo 3 o 4 veces por el mechero.

1. Colocamos los portaobjetos en el puente de tinción, lo cubrimos con cristal violeta por 1 minuto y lo lavamos con agua destilada.

[pic 9][pic 10]   [pic 11] [pic 12]

1. Cubrimos el portaobjetos con lugol de Gram por 1 minuto. Lavamos con agua destilada.

[pic 13]                    [pic 14]

1. Sostenemos el portaobjetos entre el pulgar y el índice y echamos gotas  en la superficie del decolorante alcohol acetona. Esto requiere de 10 a 30 segundos.

[pic 15]

        [pic 16]

1. Lavamos con agua destilada y colocamos nuevamente el portaobjetos en el puente de tinción y lo cubrimos con safranina que es el contra color durante 1 minuto. Lavamos con agua destilada.

[pic 17]         [pic 18] 

1. Colocamos el portaobjetos en forma vertical dejando que se escurra y que se seque.

[pic 19]

1. Observamos con el objetivo de inmersión (100x)

• Control de calidad

1. En un portaobjetos ponemos una gota de solución salina o agua destilada y con un asa previamente esterilizada cogemos un pequeña muestra de stafilococos aureus cocos gram positivos y la depositamos sobre la gota de solución salina

1. Volvimos a estirilizar el asa y tomamos una pequeña  muestra de cultivo de escherichia coli bacilos gram negativos y la depositamos sobre la misma gota de solución salina.

1. Mezclamos los dos microorganismos, sin tocar los bordes de la placa y la dejamos secar a temperatura ambiente.

1. Cuande estuvo seco lo fijamos pasándola 3 o 4 veces por el mechero

1. Colocamos los portaobjetos en el puente de tinción, lo cubrimos con cristal violeta por 1 minuto y lo lavamos con agua destilada.

1. Cubrimos el portaobjetos con lugol de Gram por 1 minuto. Lavamos con agua destilada.

1. Sostenemos el portaobjetos entre el pulgar y el índice y echamos gotas  en la superficie del decolorante alcohol acetona. Esto requiere de 10 a 30 segundos.

1. Lavamos con agua destilada y colocamos nuevamente el portaobjetos en el puente de tinción y lo cubrimos con safranina que es el contra color durante 1 minuto. Lavamos con agua destilada.

1. Colocamos el portaobjetos en forma vertical dejando que se escurra y que se seque.

1. Observamos en 100x

...