PRÁCTICAS PRESENCIALES ÁCIDOS NUCLEICOS

PRÁCTICAS PRESENCIALES

ÁCIDOS NUCLEICOS

1.- Explique los fundamentos de la extracción de DNA, indicando la función que tiene cada componente del tampón de

Se trata, después de homogenizar la muestra de material (guisantes) por medio de un triturado, de romper las membranas celulares al añadirle solución de lisis para que liberen el ADN, este queda disuelto en la solución acuosa que se pone a baño maría a una temperatura de 50º, enfriándola a continuación, después se filtra para separar las partes más grandes, añadiéndole etanol para que las partículas de ADN precipiten.

Los componentes del tampón son:

 Detergente (SDS).- la función es romper las bicapas lipídicas de las membranas y unirse a las cargas positivas de las proteínas cromosómicas liberando el ADN a la solución acuosa.

 Ácido etilendiaminotetraacético (EDTA).- es el que captura los cationes Mg2+ que las enzimas que degradan el DNA necesitan para llevar a cabo su actividad.

 Cloruro sódico.- es el que mantiene la doble hélice del ADN y actúa sobre las histonas liberándolas del ADN.

2.- La extracción de DNA es una técnica empleada también llevar a cabo técnicas moleculares como la clonación. Explique los pasos necesarios que deben realizarse para clonar un fragmento de DNA en un plásmico. Defina los siguientes términos: BAC, DNA helicasa, secuencia palindrómica, fago.

Se necesitan los cuatro nucleótidos fosfato en grandes cantidades, la Taq polimerasa y oligonucleótidos que actúan como iniciadores de la reacción.

Para realizar la clonación se produce modificaciones bruscas pero controladas de la temperatura, primero se eleva a 95ºC durante 30 segundos para provocar la separación de las dos cadenas de ADN, a continuación se baja hasta 55ºC durante 20 segundos para permitir el apareamiento de cada hebra con el cebador y, finalmente, se sube de nuevo a 72ºC para favorecer la replicación.

BAC.- Cromosoma bacteriano artificial (BAC) Versión artificial de un cromosoma bacteriano que se puede utilizar como vector de clonación para producir muchas copias de fragmentos grandes de ADN.

DNA helicasa.- Enzima que cataliza la ruptura de hidrógeno de los vínculos entre los nucleótidos DNA, descomprimiendo una molécula de doble cadena de DNA.

Secuencia palindrómica.- es un tramo de ADN en el que sus nucleótidos son inversos a los que complementa.

Fago.- virus que infecta las bacterias y que se sirve de ellas para replicar su ADN.

FOTOSÍNTESIS

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