Procedimiento Para Uso De Kit De Histamina

PROCEDIMIENTO PARA EL USO DEL KIT DE HISTAMINA VERATOX

PASOS A SEGUIR:

1.- Pesar 10gr de muestra y medir 90ml de agua, mezclarlo. Luego:

• Agitar vigorosamente por 20 seg. Esperar 5 min, agitar nuevamente por 20seg. Esperar 5 min, agitar nuevamente 20 seg.

• Dejar sedimentar por 30 segundos. (sobrenadante)

2.- Filtrar

• Para el filtrado usar una jeringa con filtro, saque el embolo, coloque el sobrenadante, colocar el embolo, presionar.

3.- Preparar el extracto, mezclar 100ul con 10ml de diluente de muestra (buffer diluente botella de 1 litro)

4.- Colocar en el porta pozos, (Ejm: si se va a analizar dos muestras cada muestra debe ir con su respectivo control es decir: debe ir 4 pozos rojos, dos serán para las muestras y dos para los controles, se deberá colocar los respectivos pozos blancos al frente.(4 pozos blancos). LUEGO

5.- Adicionar 100ul de conjugado frasco azul a todos lo pozos rojos. (4 pozos)

6.- Utilizando una sola punta pipeta adicionar el primer control en este caso seria 10 ppm (ejm) al primer pozo rojo, con la misma punta mezclar tres veces (aspirar y botar 3 veces).

Lo mismo se hace con el siguiente control 50ppm (ejm).

7.- Usando una nueva punta pipeta para cada muestra adicionar 100ul de extracto filtrado y diluido a su correspondiente pozo rojo, mezclar tres veces.

8.- Usando una punta nueva para cada pozo transfiera 100ul de cada pozo a su respectivo pozo blanco.

9.- Luego de completar la transferencia de todos los pozos agitar suavemente por deslizamiento en superficie plana por 20 segundos. Eliminar los pozos rojos.

10.- Incubar por 10 min (pozos blancos) en oscuridad.

11.- Botar el contenido de los pozos blancos, golpee enérgicamente sobre papel toalla para eliminar restos de residuos líquidos.

Usando la pizeta llenar los pozos con buffer de lavado. Botar el líquido. Repetir tres veces. Golpear enérgicamente contra el papel toalla para eliminar restos de líquido.

12.- Usando una nueva punta pipeta para cada pozo adicionar 100ul de substrato (frasco verde) a todos los pozos.

La punta va hasta el fondo del pozo. Agitar por deslizamiento en superficie plana por 20 segundos.

12.- Incubar por 10 minutos pero en oscuridad.

13.- Usando una nueva punta pipeta por pozo, adicionar 100ul de solución stop (frasco rojo) a todos los pozos. La punta va hasta el fondo.. Agitar por

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