REACCIONES BIOQUIMICAS

Reducción de Nitratos a nitritos

Principio

Determinar la capacidad de un microorganismo de reducir los nitratos a nitritos o gas nitrógeno libre.

Objetivos

Ayudar a diferenciar entre especies, géneros y especies de mycobacterium. Tomando en cuenta que no todos los microorganismos son capaces de reducir el nitrato en nitrito, utilizándolo como fuente de oxígeno para tener energía y para ello debe de ser en medios anaerobios.

Bioquímica

La reducción de nitratos (NO3-) a nitritos (NO2-) y a nitrógeno gaseoso (N2) por lo común se produce en condiciones de anaerobiosis, en las cuales en un microorganismo produce su oxígeno del nitrato. El oxígeno actúa como un aceptor de protones, y un aceptor final de electrones. La mayoría de las bacterias aerobias son anaerobias facultativas y sólo pueden reducir los nitratos en ausencia de oxígeno. Esta respiración anaerobia es un proceso de oxidación en el que las sustancias inorgánicas (sobretodo nitrato, sulfato y rara vez carbonato) producen oxígeno para actuar como un aceptor de electrones a fin de proporcionar energía.

Las posibilidades del producto final en la reducción de nitrato son muchas: nitrito (NO2), amoníaco (NH3 ), nitrógeno molecular (N2 ), óxido nítrico (NO), óxido nitroso (N2O) o hidroxilmina (R-NH-OH). El producto formado depende de la especie bacteriana. El producto final más común es el nitrógeno molecular (N2 ) (un gas) formado por la vía de reducción del nitrito (NO2). La reducción de nitrato a nitrógeno gaseoso, u óxido nitroso se denomina desnitrificación.

Medios de cultivo empleados: Medio nitrato de potasio.

• Caldo nitrato pH 7.

• Agar nitrato pH 6.8.

Ingredientes:

• Extracto de carne.

• Peptona de gelatina.

• KNO3 0.1%.

• Agar (sólo en medio sólido).

• Agua desionizada.

Métodos de preparación:

1. Pesar la cantidad exacta como indica el rótulo.

2. Rehidratar con agua destilada o desmineralizada.

3. Calentar la solución con suavidad.

4. Fraccionar alrededor de

• Agar nitrato: 5ml por tubo (13x100mm).

• Caldo nitrado: 1ml por tubo (13x100mm) agregar tubos de Durham invertidos para detectar la producción de gas.

Método de esterilización: autoclave 121°C, 15 lb, 15min.

Dejar el medio agar que se solidifique en posición inclinada.

Enfriar cualquiera de los medios antes del uso y conservar en refrigerador (4- 10°C). dura aprox. 6 meses.

Agregar reactivos de nitrato antes de intentar una interpretación. La mayoría de los microorganismos reducen el nitrato dentro de 24hrs. ZoBell y Hitches recomiendan un medio semisólido que contenga 0.2-0.4% de agar, ya que incrementa la reproducción, permite la movilidad del microorganismo, difunde con facilidad los nutrientes y productos de desecho e incrementa las actividades reductoras. Encontraron

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