Reacció en Cadena de la Polimerasa PCR

Reacció en Cadena de la Polimerasa  

(en angles: Polymerase chain reaction) (PCR)

La reacció en cadena de la polimerasa (PCR) és una tècnica de laboratori comuna utilitzada per fer moltes còpies (milions o milers de milions!) d'una regió particular de l'ADN. Aquesta regió de l'ADN pot ser qualsevol cosa que l'experimentador estigui interessat. Per exemple, podria ser un gen la funció del qual un investigador vol entendre, o un marcador genètic utilitzat pels científics forenses per combinar l'ADN de l'escena del crim amb els sospitosos.

Els passos de la PCR

Els ingredients clau d'una reacció PCR són la Taq polimerasa, l'ADN de plantilla i els nucleòtids (blocs de construcció de l'ADN). Els ingredients es posen en un tub, juntament amb els cofactors que necessita l'enzim, i es sotmeten a cicles repetits d'escalfament i refrigeració que permeten sintetitzar l'ADN.

Els passos bàsics són:

1. Desnaturalització (96ºC): Escalfeu la reacció fortament per separar o desnaturalitzar les cadenes d'ADN. Això proporciona una plantilla d'una sola cadena per al següent pas.
2. Recuit (55-65ºC): refreda la reacció perquè els primers puguin unir-se a les seves seqüències complementàries a l'ADN de la plantilla monocatenària.
3. Extensió (72ºC): Augmenteu les temperatures de reacció de manera que la Taq polimerasa estén els primers, sintetitzant noves cadenes d'ADN.

Aquest cicle es repeteix 25- 35 vegades en una reacció PCR típica, que generalment dura de 2 a 4 hores, depenent de la durada de la regió d'ADN que es copiï. Si la reacció és eficient (funciona bé), la regió objectiu pot passar d'una o poques còpies a milers de milions.

Utilitzar l'electroforesi en gel per visualitzar els resultats de la PCR

Els resultats d'una reacció per PCR solen visualitzar-se (fer visibles) mitjançant electroforesi en gel. L'electroforesi en gehl és una tècnica en la qual fragments d'ADN són arrossegats a través d'una matriu de gel per un corrent elèctric, i separa fragments d'ADN segons la mida. Normalment s'inclou un estàndard, o escala d'ADN, de manera que es pot determinar la mida dels fragments de la mostra de PCR.

Fragments d'ADN de la mateixa longitud formen una "band" al gel, que es pot veure per l'ull si el gel està tacat amb un tint d'unió a l'ADN. Per exemple, una reacció de PCR que produeixi un fragment de parell base 400 (bp) es veuria així en un gel:

Una band d'ADN conté moltes, moltes còpies de la regió d'ADN objectiu, no només una o poques còpies. Com que l'ADN és microscòpic, moltes còpies han d'estar presents perquè el vegem a simple vista. Aquesta és una de les raons per les quals la PCR és una eina important: produeix suficients còpies d'una seqüència d'ADN perquè puguem veure o manipular aquesta regió de l'ADN.

...