Transporte De Membrana

Introducción.

La absorciometría se basa en la cantidad de radiación electromagnética (del espectro UV y visible) que son capaces de absorber ciertos compuestos(cromóforos) en función de la cantidad de sustancia presente. Cuando una radiación alcanza la muestra se produce una absorción parcial lo que hace que se produzca una transición entre los niveles energéticos de la sustancia, el resto de la radiación es transmitida. Dicho fenómeno es asociado con los conceptos de absorbancia y transmitancia respectivamente. Ademas la absorbancia depende directamente de las concentraciones que posea la muestra.

El instrumento que se utiliza para determinar la absorbancia y transmitancia de las sustancias es el espectrofotómetro; el cual posee un monocromador, existen los que solo operan en el espectro visible y otros que también abarcan el UV. Para obtener un resultado óptimo es necesario calibrar este instrumento cada vez que se cambie la longitud de onda medida, utilizando un blanco que suele ser agua destilada: al estar calibrado la absorbancia es 0 y la transmitancia es 100, debido a que el agua al ser transparente no absorbe ninguna de las radiaciones electromagnéticas del espectro visible, solo tras ese paso se puede proceder a medir los niveles de absorbancia de la muestra. Existe formulas matemáticas en las que se relacionan estos conceptos, estas son:

• Ley de Lambert-Beer.

Esta ley relaciona la fracción de luz absorbida con la concentración de las soluciones.

A= ebc.

Donde:A= absorbancia

b:camino óptico.

c:concentración en M.

e: coeficiente de extinción molar, en cm^-1 x M^-1 (es característica de cada cromóforo y representa la probabilidad de que el cromóforo absorba la radiación)

• La transmitancia es la fracción de la intensidad incidente transmitida por la solución. Se expresa en %T.

%T= I/Iº. Donde I= a la intensidad de luz incidente e Iº= a la intensidad de luz transmitida.

Además, si se conoce las concentraciones, absorbancia y longitudes de ondas operantes es posible realizar gráficos de absorbancia v/s concentración o absorbancia v/s longitud de onda y despejar directamente de ellos alguna de las incógnitas requeridas como es el caso de la determinación de la concentración en la muestra problema. O bien utilizar ley de Lambert-Beer tras encontrar la absorbancia de la muestra.

OBJETIVOS

• Reconocer las funciones de un electrofotometro. Elaborando un espectograma.

• Identificar la relación entre la concentración molar de una solución con su absorvancia.

HIPÓTESIS

El espectro de absorción muestra la radiación electromagnética de un material que absorbe dentro de un rango de frecuencias que en este caso es de 330 – 560 nanómetros de longitud de onda, donde se espera ver que halla un pic de absorbancia con respecto a una sustancia dada, que en el practico será la riboflavina. Esta es una vitamina, la transición esta en la energía correspondiente al UV y parte del espectro azul entre los rangos de 350 – 450 nanómetro. Esta transición corresponde a la presencia de una banda de absorción en la región azul del espectro visible, la cual puede ser utilizada para cuantificar la concentración de riboflavina mediante la espectroscopia de absorción molecular.

MATERIALES

• Electrofotómetro

• Tubos de ensayo

• Gradilla

• Agua destilada

• Riboflavina

• Micropipetas de 1ml

• Micropipetas de 0,2 ml

• Puntas para micropipetas

• Tubos de ensayo pequeño para electrofotometro

PROCEDIMIENTO

1. A un tubo de ensayo colocar 4 ml de Riboflavina con 1 ml de agua destilada. Enumerar 5 tubos de ensayo. En el tubo numero 1 formar una solución 0,1 M, incorporando 1 ml de Riboflavina, en 9 ml de agua destilada, en el tubo numero 2 se incorporaran 2 ml de Riboflavina en 8 ml de agua destilada, en el tubo numero 3 se añaden 3ml de Riboflavina en 7 ml de agua, en el numero 4 se agregan 4 ml de Riboflavina en 6 ml de agua y en el ultimo tubo se competan 5 ml de Riboflavina en 5 ml de agua.

2. Con la solución patrón, es decir, la disolución al 80% de Riboflavina, se retira 1 ml y se incorpora en un tubo de ensayo especial para el electrofotometro y en otro tubo de ensayo se incorpora 1 ml de agua destilada, siendo esta la solución blanco.

3. La solución blanco se pone en el sitio del electrofotometro destinado, para verificar que la absorbancia sea igual a cero y la transmitancia igual a 100. Después de esto colocar la solución patrón para obtener su absorbancia. Repetir el procedimiento modificando los nanómetros en 10, y cuando se aproxime la absorvancia a 1, volver a hacer el procedimiento, pero modificando los nanómetros en 5. Desde los 330 nm hasta los 550 nm.

4. Cuando se encuentre el máximo valor de absorvancia, es decir, igual a 1, el valor del nanómetro, se utiliza para medir la absorvancia y transmitancia de las soluciones de los tubos enumerados,

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