Ventajas Y Desventajas Del Metodo De Cuantificacion De Biomasa

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA

EDER RENATO OCAÑA JARA

17-04-2011

 TURBIDIMETRÍA

La determinación de la turbidez (turbidimetría) es un método práctico para controlar el crecimiento bacteriano. Cuando las bacterias se multiplican en un medio líquido este se torna turbio o nebuloso por las células.

El instrumento utilizado para medir la turbidez es un espectrofotómetro. En el espectrofotómetro un haz de luz se transmite a través de una suspensión bacteriana a una célula fotoeléctrica. Cuando la cantidad de bacteria aumenta, menos luz alcanza la célula fotoeléctrica. Este cambio de luz se registra en la escala del instrumento como porcentaje de transmisión. También se puede determinar como una medición logarítmica del instrumento denominada absorbancia o como un valor derivado del porcentaje de transmisión.

La absorbancia se utiliza para graficar el crecimiento bacteriano. Cuando las bacterias están en fase logarítmica de crecimiento o de declinación la representación de la absorbancia frente al tiempo forma una línea casi recta. Si las lecturas de la absorbancia son compatibles con el recuento en la placa del mismo cultivo esta correlación se puede utilizar en estimaciones futuras del número de bacterias obtenidas directamente por turbidimetría.

Para que puedan visualizarse las primeras trazas de turbidez debe haber más de un millón de células por mililitro y se precisan de 10 a 100 millones por mililitro para que la suspensión se vuelva lo bastante turbia como para ser medida en un espectrofotómetro. Por lo tanto la turbidimetría no es un método útil para medir la contaminación de líquidos por un número relativamente pequeño de bacterias.

En una suspensión microbiana la cantidad de microorganismos está directamente relacionada con la turbiedad o densidad óptica. La metodología es útil con suspensiones de densidad microbiana baja y con cultivos en donde los microorganismos son unicelulares y con un tamaño de unos cuantos micrómetros, características que les permiten mantenerse suspendidos y homogéneamente distribuida; en tanto que con microorganismos de mayor tamaño y con aquellos productores de polisacáridos esta metodología no es adecuada.

 DENSIDAD ÓPTICA

La cantidad de luz incidente absorbida por una suspensión bacteriana es medida por una célula fotoeléctrica.

Se define como la proporción de luz incidente absorbida por una suspensión y se puede calcular como: luz absorbida/luz incidente

Si medimos la absorbancia de un cultivo a distintos intervalos de tiempo, la curva que relaciona estos parámetros representa la curva de crecimiento de una población bacteriana con sus distintas fases.

Las fases son: fase de latencia, fase de crecimiento exponencial, fase estacionaria y fase de muerte.

 CURVAS DE CRECIMIENTO

Curva del Crecimiento Bacteriano.

La curva del crecimiento bacteriano resulta de la representación gráfica de la determinación periódica del número de células viables por mililitro que existen en un líquido inoculado con células microbianas provenientes de un cultivo que ha crecido previamente hasta la saturación.

Dicha curva se divide en seis fases, como se representa en la figura, mismas que se simbolizan con letras de la A a la F. A continuación también se muestra un cuadro con las características principales de cada fase y se desarrollan las fases más relevantes.

Parte de la Curva Fase Tasa de Crecimiento.

A Rezago Cero

B Aceleración Creciente

C Exponencial Constante

D De retraso Decreciente

E Estacionaria máxima Cero

F Declinación Negativa (muerte)

Fase de Rezago

Este periodo consiste en la adaptación de las células microbianas a su nuevo ambiente. En esta fase, las células microbianas se encuentran empobrecidas en cuanto a metabolitos y enzimas, esto debido a las condiciones desfavorables que representaba el cultivo previo.

Fase Exponencial

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