Determinación De Glucosa Por Espectrofotometria

Determinación de glucosa por espectrofotometría.

Muchos compuestos absorben luz en las regiones visibles o ultravioleta del espectro y esta propiedad puede utilizarse para determinar su concentración. La capacidad de absorción (absorbencia) de la luz dependerá tanto de tipo de compuesto como de su concentración y de la longitud de onda de la luz empleada. Por eso se utiliza luz monocromática, es decir luz con una longitud de onda definida que puede aislarse a partir de luz blanca por medio de un monocromador. La luz monocromática de intensidad 0 pasa atreves de un recipiente cuadrangular de vidrio o de cuarzo (cubeta, celda de medición) que contiene una solución del material absorbente. La intensidad de la luz que sale, atenuada, se mide en un detector. la absorción de una solución (llamada también extinción) se define como el logaritmo negativo del cociente, de acuerdo con la ley de Lambert-Beer, la A es proporcional a la concentración del material absorbente y al espesor de la solución. El coeficiente de absorción y depende, como se menciono anteriormente, del tipo de sustancia y de la longitud de onda.

Los espectrofotómetros presentan cinco componentes básicos:

• Una fuente de luz que puede ser de tungsteno, infrarroja o de luz ultravioleta, dependiendo del espectro en que se trabajara (visible, infrarrojo o ultravioleta, respectivamente). Una lámpara común de filamento de tungsteno emite una luz que, al pasar por un prisma, se descompone en varios colores, como lo que ocurre al formarse el arco iris. Cada color transmite o refleja una longitud de onda; el conjunto de todas estas longitudes es el espectro de luz visible, el cual comprende valores desde 380nm hasta 700nm. El espectro de luz ultravioleta cubre longitudes de onda menos de 380 nm y el espectro infrarrojo abarca longitudes de onda desde 750 nm hasta 2000 nm; estos dos espectros son invisibles al ojo humano.

• Un monocromador para la selección de la longitud de onda que incidirá sobre la muestra.

• Una celda o cubera para la muestra.

• Un detector para medir la intensidad de la luz transmitida (porcentaje de tramitación, %T) o absorbida (absorbancia, A).

• Un sistema de lectura.

La glucosa continuamente filtrada por los glomérulos, vuelve en su totalidad a la sangre, ya que se reabsorbe completamente a nivel de los tubulos renales. Existe un dintel renal de lo glucosa, lo que explica que hasta que no se sobrepasen los 180 mg/dl de glucosa sanguínea, no aparece flucosuria en condiciones fisiológicas. Sin embargo puede aparecer glucosuria con normoglucemia, cuando existe fallo renal. En los diabéticos con nefropatías, se encuentra elevado el dintel renal de la glucosa, apareciendo glucosuria,

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